Как протекает вирус коксаки у взрослых: Симптомы и признаки вируса коксаки у детей и взрослых, лечение и профилактика.

Содержание

Энтеровирусные инфекции

 

 

 

 

Энтеровирусные инфекции – группа заболеваний, причина которых – вирусы Коксаки и ЕСНО, рода Enterovirus, семейства Picornaviridae. Особенность этих вирусов – размножение в кишечнике, выделение с фекалиями и самое страшное – политропность, то есть способность поражать разные органы, что ведет к появлению самых непредвиденных симптомов.

Особенности энтеровирусной инфекции (ЭИ) как таковой

  • Инкубационный период – время от момента заражения до появления первых симптомов болезни – длится при ЭИ 2-7 дней.
  • Механизм передачи заболевания – фекально-оральный, пути передачи – пищевой, водный.
  • Источники инфекции – вирусоноситель или заболевший человек.
  • Наиболее восприимчивы к болезни дети.

Симптомы и формы болезни

Болезнь начинается с лихорадки 39-40˚С, головной боли, общей слабости, снижения аппетита, нарушения сна. Наблюдается покраснение кожи лица и шеи, глаз, сыпь в виде пятен и узелков по всему телу. Слизистая оболочка неба отечная и покрасневшая.

Существуют различные формы болезни, что по-разному проявляются клинически.

• Серозный менингит

Как правило, имеет отчетливую картину с менингеальными симптомами, что ярко проявляются на высоте лихорадки и исчезают с 3 недели болезни. Лихорадка длится около 2 недель. Боль концентрируется в лобной части головы. Сопровождается сыпью, похожей на корь. Часто появляются катаральные явления: слезотечение, светобоязнь, жидкие выделения с носа. Подтверждается диагноз анализом спинномозговой жидкости.

• Герпетическая ангина 

При осмотре горла в глаза бросается зернистость задней стенки глотки. На покрасневших небных дужках с самого начала болезни появляются высыпания в такой последовательности: узелки—пузырьки—язвы с красным ободком, элементы не склонны к слиянию, их количество — от 2 до 15. Пациент отмечает болезненность при глотании, лимфатические узлы на ощупь увеличены и уплотнены. Исход герпетической ангины, как правило, благоприятный.

• Кишечная форма энтеровирусных инфекций 

Протекает в виде гастроэнтерита с температурой тела до 39˚С. Для данной формы характерно наличие диспепсического синдрома: пенистая диарея около 5 раз на сутки с примесью слизи и зелени, со специфическим неприятным запахом, неоднократная рвота, вздутие, урчание, и разлитые боли в животе. Но зияние ануса и спазмы кишечника отсутствуют. Во время пальпации больной отмечает болезненные ощущения ниже пупка вдоль белой линии живота, что свидетельствует о втягивание в процесс корешков нижне-грудного отдела спинного мозга. Продолжительность болезни – до 2 недель. 

Важно знать!

Дети труднее переносят кишечную форму болезни: их долго беспокоят боли в животе и расстройства пищеварения (характерна вторая волна симптомов), им угрожает быстрое обезвоживание организма из-за постоянных диарей и легко поражаются верхние дыхательные пути.

• Миокардит, перикардит 

Развиваются практически одновременно, поскольку вирусы-возбудители одинаково склонны к обеим тканям сердца – перикарду (околосердечная сумка) и собственно сердечной мышце — миокарду. Заболевание сначала напоминает ОРВИ, а через 1 неделю присоединяются боли в сердце, неприятные ощущения в области грудной клетки, общая слабость, лихорадка. При прослушивании сердца врач отмечает появление глухих тонов и специфического шума, а на ЭКГ наблюдаются нарушения ритма.

• Конъюнктивит 

Проявляется резями в глазах, боязнью яркого света, слезотечением, отечностью век и склер. Выделения из глаз поначалу мутные, с желтоватым оттенком, а со временем становятся гнойными. Через несколько дней «светлого промежутка» возможно поражение спинного мозга и развитие лихорадки.

• Миалгии 

Слово происходит от латинских слов «Мио» – мышца, «алгия» – боль. Миалгии – болевые ощущения в скелетных мышцах, интенсивность которых возрастает при движениях, длительность от 30 секунд до 1,5 минуты. Мышцы живота при пальпации напряжены, дыхание щадящее, поверхностное, кожа бледная. Болезнь продолжается около недели.

Диагностика

• Врачу необходимо узнать о возможном контакте пострадавшего с вирусным больным, 

• обратить внимание на симптомы заболевания, 

• объективная оценка врачом состояния пациента, осмотр узкими специалистами (ЛОР, невролог, кардиолог, окулист).

• Спинномозговая жидкость (ликвор) – 2-3 тыс. лейкоцитов в 1 мм куб., сначала превышает количество палочкоядерных нейтрофилов, а в дальнейшем сохраняется лимфоцитоз (на пользу вирусной инфекции). Ликвор бесцветный, прозрачный, вытекает под давлением. 

• Носоглоточные смывы подходят как материал для диагностики на протяжении первых 2-3 недель болезни.

• Кал как материал для анализов подходит при выраженном поносе, а выделение вируса из кишечника длится первые 6-8 недель.

• Перикардиальная жидкость, которая находится между сердечной мышцей и околосердечной сумкой — отличный материал для исследования вовремя миоперикардита. Но к манипуляции редко прибегают из-за ее сложности и негативных последствий.

Совет!

При подозрении на энтеровирусную инфекцию необходимо сразу назначать специфические анализы с использованием биологических выделений, поскольку период максимального выделения вируса из организма — первая неделя заболевания.

К сожалению, даже серологическое исследование не всегда доказывает присутствие в организме энтеровирусов. Только четырехразовое нарастание антител в парных сыворотках (взятие производится в первые дни и на 2-3 неделю болезни у пациента или выздоравливающего человека) и является достоверным признаком данной инфекции.

Лечение

✔  Постельный режим, диета с исключением экстрактивных веществ и клетчатки.

✔  К сожалению, средств, конкретно нацеленных на энтеровирус, не существует. Применяются противовирусные препараты «Виферон», «Циклоферон». 

✔  При затяжном и тяжелом течении патологии возможно присоединение агрессивных бактерий, и тогда используют антибактериальные средства

Совет!

Антибиотики первого ряда для лечения кишечных инфекций — это нитрофураны, триметоприм. Во время их использования стоит помнить о назначении полезных бактерий и средств, что улучшают состояние микрофлоры кишечника и предупреждают развитие дисбактериоза – «Линекс», «Бифиформ», «Бифилиз», лактулоза.

✔   В основном лечение симптоматическое.

  • При отеке мозга используют мочегонные средства, например, фуросемид. Глюкозу в данном случае используют с осторожностью и только при лабораторно подтверждённом низком уровне сахара крови, чтобы не усилить отек мозга.
  • Откорректировать водно-солевой баланс, нарушение которого происходит вследствие рвоты, диареи, повышенной потливости, помогают растворы «Регидрон», «Дисоль», «Трисоль», реополиглюкин, натрия хлорид, «Неогемодез». 
  • Выведение вредных веществ осуществляется при помощи «Смекты», «Атоксила», активированного угля.

Совет! 

Особенного подхода к возобновлению жидкости в организме требуют дети. 

При І степени обезвоживания суточное количество жидкости составляет 130-150 мл/кг массы тела, при ІІ степени -170-200 мл/кг, при ІІІ степени -200-220 мл/кг. При обезвоживании ІІ и ІІІ степеней растворы вводят внутривенно.

  • Состояние больного при конъюнктивите с кровоизлияниями облегчают использованием глазных антисептических капель и нахождением в затемненном помещении. 
  • Болевой синдром при миалгии купируют обезболивающими препаратами, такими, как анальгин или баралгин. Отвлекающая терапия горчичниками и грелками также эффективна. 
  • При герпетической ангине стоит отказаться от употребления острой и механически грубой еды, полоскать рот после приема пищи ромашковым или содовым раствором.
  • Лечение воспаления сердечных оболочек должно осуществляться в стационаре под присмотром кардиолога. 

Профилактика

• Неспецифическая: очистка загрязнения внешней среды, обеззараживание отходов.

• Специфическая предусматривает использование белков для стимуляции иммунитета: людям, которые контактировали с больными, вводится внутримышечно иммуноглобулин, а на протяжении недели капается в нос интерферон.

 

При появлении симптомов энтеровирусной инфекции немедленно обратитесь к врачу.

 

Здоровья Вам и Вашим близким!

Статью подготовил врач медицины неотложных состояний Загродская Татьяна Владимировна.

«Рука-нога-рот» или вирус Коксаки: симптомы и лечение

Если ребенок страдает от болезненных пузырьков во рту, на руках и ногах, при этом наблюдается сыпь зудящая и раздражающая, вероятно он заразился вирусом Коксаки. Насколько серьезен синдром «рука-нога-рот»? Как проявляется вирус Коксаки? Как лечить заболевание? Ответы на эти вопросы – ниже в тексте.

 Вирус Коксаки – что это?

Возбудитель заболевания впервые был выделен из человеческих фекалий в американском городе Коксаки (штат Нью-Йорк). Поэтому он получил такое название. Вирусы Коксаки относятся к семейству энтеровирусов. Заболевание наиболее распространено у младенцев и детей постарше, хотя инфекции подвержены также и взрослые. Любые энтеровирусные инфекции считаются болезнями грязных рук, и вирус Коксаки не исключение. Вирусы этого типа располагаются в пищеварительном тракте человека.

Распространяется вирус орально-фекальным путем – то есть заносится в рот с грязными руками и через зараженные продукты, которые не прошли термическую обработку, воду, а также, как и вирус гриппа,  воздушно-капельным путем.  Беременные женщины могут передать вирус Коксаки своим новорожденным. Поэтому во время беременности женщины должны сообщить гинекологу о появлении симптомов инфекции, особенно если приближается срок родов.

Читайте также: Дети и вирус дельта: риски заболеть COVID-19

Дети могут передавать заболевание, играя вместе. Вирус выживает в течение длительного периода времени на различных поверхностях. Это означает, что детские сады, школы и детские площадки являются основными источниками заражения. Отдельные случаи и вспышки синдрома Коксаки происходят по всему миру в любое время года, но чаще встречаются летом и в начале осени. Возбудитель не передается от животных.

Различают 2 типа возбудителей Коксаки:
  • Вирусы типа A вызывают боль в горле, волдыри или сыпь на руках, ногах и во рту. Возможно появление конъюнктивита. Это характерное проявление синдрома «руки-ноги-рот».
  • Вирусы типа B вызывают эпидемическую плевродинию (болезнь Бронхольма), которая характеризуется приступами боли в области груди, головной болью, реже – плевритом.

Оба типа вируса Коксаки способны вызывать такие заболевания, как менингит (воспаление спинного мозга), перикардит (воспаление сердечной сумки), миокардит (воспаление сердечной мышцы), а также ювенильный диабет (тип 1). К счастью, это происходит редко.

Симптомы вируса Коксаки у детей

Наиболее частые проявления инфицирования вирусом Коксаки:

  • Кожные высыпания или болезненные пузыри. Сыпь обычно появляется на ладонях, между пальцами, стопах ног, на груди, голове.
  • Герпетическая ангина. Это инфекция полости рта и горла, которая протекает больше как стоматит. Во рту появляются красные пузырьки с жидкостью, они лопаются, образуя эрозии и ребенку больно кушать.
  • Геморрагический конъюнктивит. Инфекция поражает глаза, приводит к их покраснению и слезотечению. Иногда зрение ребенка становится размытым. Возможно появление болезненной чувствительности к свету.
  • Кишечная форма. Проявляется болью в животе, незначительным повышением температуры, диареей до 8 раз в сутки (1-3 дня), плохим аппетитом, мышечными болями и чувством общего недомогания. У малышей может болеть горло, начаться насморк и кашель.

После заражения вирус распространяется в кишечнике человека. Инкубационный период составляет 3-5 дней. После этого можно ожидать появления язв во рту, сыпи на руках и ногах. Больной наиболее заразен в течение первой недели. Но вирус может присутствовать до недели после исчезновения симптомов.

 Диагностика вируса Коксаки у детей

Педиатр обычно диагностирует инфекцию по внешнему виду. Болезненные волдыри во рту или сыпь на руках и ногах распознать легко. Но язвы во рту могут вызывать также многие другие инфекции (например, вирус герпеса). Обычно врач распознает вирус Коксаки, основываясь на возрасте пациента и характере симптомов.

Читайте также: Как подготовить ребенка к детсаду.  Список советов

В редких случаях возможно направление образца мазка из горла или кала в лабораторию. Исследование позволяет определить, какой энтеровирус вызвал заболевание. Но, поскольку тестирование занимает от 2 до 4 недель, врачи обычно не проводят эти тесты.

 Лечение вируса Коксаки у детей

Специального лечения этой инфекции не существует. В подавляющем большинстве случаев кожные проявления исчезают через 7-10 дней (иммунная система обычно способна справиться с возбудителем). Врачи для облегчения симптомов заболевания у детей могут назначить жаропонижающие и обезболивающие препараты, а  также противовирусные препараты прямого действия. Лекарственные средства для полоскания рта и спреи способны уменьшить дискомфорт во рту.

Больной ребенок не должен посещать школу или детский сад. Ему требуется покой. Необходимо пить много жидкости, чтобы предотвратить обезвоживание. Но не следует давать ребенку кислых соков, так как это может дополнительно раздражать болезненные пузырьки во рту. Предпочтительна мягкая и теплая еда, например, супы и бульоны, их легче глотать.

Лариса Кузнецова

Коксаки прибыл в Петербург вместе с отпускниками. Проверьте стопы и ладошки у ваших детей — Общество — Новости Санкт-Петербурга

Фото: Victoria Borodinova / Pixabay.comПоделиться

О вирусе Коксаки большинство населения страны узнало в августе 2017 года, когда случилась вспышка заболеваемости среди российских туристов, отдыхавших в Турции. Понятно, что они привезли его на родину и вирус продолжал распространяться в основном в детских коллективах — садах и школах. Потом было относительное затишье, в прошлом году, когда распространение всех инфекций резко сократилось, в том числе потому что немногие могли выехать в отпуск на юга, и вируса Коксаки стало меньше. Сегодня в разных регионах страны то и дело появляются сообщения о поражении этим вирусом детей.

Петербургский Роспотребнадзор в статистике заболеваемости, связанной с энтеровирусной инфекцией, отдельно вирус Коксаки не выделяет: энтеровирусов много, а проявляются они похоже. Как сообщила пресс-служба Роспотребнадзора «Фонтанке», в 2020 году было зарегистрировано 118 случаев заболевания, в 2021-м за 8 месяцев — 129. В их число входит и тяжелая форма болезни, которую они способны вызвать, — серозный менингит: в 2020-м заболели 13 человек, за 8 месяцев 2021-го — 8.

Энтеровирус, как и любой возбудитель болезни грязных рук, передается контактным путем — легко и быстро. Однако если с менингитом — очень опасным заболеванием — в статистических данных можно не сомневаться, то с легкой формой сложнее: болеть болеют, но Коксаки как бы ни при чем.

Как перепутать ОРВИ с болезнью, вызванной вирусом Коксаки

На прошлой неделе в клинику СПбГПМУ скорая помощь доставила 10-месячного малыша, которому родители в течение всего дня не могли никакими препаратами сбить температуру под 40. Это был первый день болезни, и, кроме красного горла, никаких других симптомов. Но уже на следующее утро, то есть через сутки с момента заболевания, врачи стационара обнаружили афтозные элементы на слизистой полости рта и скудную, бледную сыпь на ногах. ПЦР-исследование подтвердило их подозрение: причина болезни — энтеровирус Коксаки. Где такой маленький ребенок мог им заразиться? Выяснилось, что в семье есть старшие дети, один из них и принес его из сада. Причем у него самого заболевание протекало с немного покрасневшим горлом и температурой чуть выше 37. И если бы самый младший не заболел, все думали бы, что у старшего — банальное ОРВИ.

Вообще, врачи говорят, что самые «опасные» с точки зрения распространения энтеровирусной инфекции (не только Коксаки) — подростки, потому что они часто переносят заболевание вообще без симптомов или высыпания у них скудные, бледные, на которые не обращают внимания и они проходят сами по себе.

Марина Дессау, заведующая отделением инфекционных и паразитарных заболеваний Городской поликлиники № 122 рассказала: «У детей часто это заболевание путают с ангиной, ОРВИ и родители не обращаются к врачу, если его проявления ребенка сильно не беспокоят. Взрослым пережить его сложнее и они обращаются к инфекционисту чаще детей: их сильно обсыпает некрасивыми волдырями — они возникают на коленях, локтях, но больше всего страдают ладони и ступни. Причем все эти места с сыпью болят, а потом еще и шелушатся, когда патологический процесс утихает. Неприятно, конечно, но тяжелых последствий, к счастью, не бывает, да и заражаются они реже. Тяжелая форма Коксаки с менингитом или энцефалитом — редкая история, даже ротовирусы провоцируют их чаще, и в основном у детей».

По словам Марины Дессау, на сезон в обычной районной поликлинике на одного инфекциониста приходится 20–25 человек. Но с ярко выраженными проявлениями меньше — 10–15.

Почему Коксаки недолго живет на севере

Как рассказали «Фонтанке» петербургские врачи, Коксаки проводит время у нас, как правило, до глубокой осени. И в этом году заболеваний, с ним связанных, будет больше, чем в прошлом: в 2020-м из-за коронавирусных ограничений россияне редко выезжали на южные курорты, в этом отпуск на море был более доступным. А чем больше отпускников едет на юг, тем больше вируса у нас: эта южная инфекция доставляется в Петербург в основном с морских курортов. Причем если там она живет в окружающей среде, то в наших северных широтах может существовать только кочуя от человека к человеку, а когда этот путь передачи пресекается, то и заболеваемость сходит на нет, потому что в окружающей среде ему холодно. Но, к счастью, до того уровня заболеваемости, что мы пережили в 2017 году — далеко, говорят врачи.

Если болезнь протекает легко, опасаться менингита не стоит

Анна Назарова, ассистент кафедры инфекционных заболеваний СПбГПМУ, объяснила «Фонтанке», как проявляется Коксаки у детей:

— Поскольку к нам таких пациентов доставляет скорая помощь, это значит, что болезнь нельзя назвать легко протекающей. Дети жалуются на головную и мышечную боли, озноб, потерю аппетита, высокая температура может держаться на уровне 39–40 градусов и плохо поддается жаропонижающим препаратам. Все это говорит о синдроме интоксикации. Проблема с диагностикой этого заболевания в том, что вирус Коксаки может очень по-разному проявляться. С одной стороны, этот диагноз можно поставить по клиническим проявлениям: сыпь на ладошках ребенка, стопах, афты (специфические образования во рту и на горле). С другой — из-за вируса может пострадать центральная нервная система — развивается менингит, энцефалит или менингоэнцефалит, это тяжелая форма, с ней можно попасть в отделение реанимации и интенсивной терапии. Когда поражаются кожа и слизистые, значит это легкая форма заболевания, сейчас, к счастью, распространяется именно она. Если у ребенка появилась сыпь на стопах и ладошках, это вовсе не значит, что болезнь может перетечь в ее грозную форму — менингит или энцефалит. Поражение ЦНС при Коксаки — вовсе не осложнение болезни, а другая ее форма, она и начинается по-другому: сразу — тяжело. Температура резко поднимается до 38–39, а то и 40 градусов, возникает головная боль, рвота, состояние может усугубляться — вплоть до нарушения сознания, судорог. То есть болезнь сразу развивается как серозный менингит. Считается, что форма заболевания (легкая или тяжелая) зависит и оттого, сколько возбудителя попало в организм и от иммунитета ребенка — способна ли она эффективно встать на защиту. И конечно, от типа энтеровируса. Серозными менингитами, вызванными вирусом Коксаки, страдают чаще дети с серьезными хроническими заболеваниями, например сердца, легких, почек. Или страдающие заболеваниями желудочно-кишечного тракта.

Где теряются пациенты, не попадающие в статистику

Традиционно в СПбГПМУ направляют детей с такими инфекциями, как скарлатина, корь, краснуха, псевдотуберкулез, начало которых похоже на Коксаки. Родители, испуганные высокой температурой ребенка и сыпью, вызывают скорую помощь, а ей трудно очень быстро определить, какая из детских инфекций поразила ребенка. Бригада ставит предварительный диагноз, например «скарлатина под вопросом» и доставляет пациента в стационар.

А там обязательно проводится дифференциальная диагностика. Именно поэтому в официальную статистику попадают в основном пациенты стационаров. В ней нет ни тех, кто переносит ее на дому, ни тех, кто лечится в частных клиниках. Но только в Педиатрический университет за сезон попадало в разные годы от 100 до 150 человек.

Сейчас в Петербурге самый разгар заболеваемости, вызванной вирусом Коксаки — он обычно начинается в августе и длится до октября, а то и до ноября. Поэтому врачи предупреждают родителей своих пациентов: эту болезнь грязных рук сложно предупредить, но можно заметить на раннем этапе. И не допустить ее распространения. Нужно просто быть внимательнее к своим детям.

Ирина Багликова, «Фонтанка.ру»

Фото: Victoria Borodinova / Pixabay.com

ЭНТЕРОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ: ЧТО НАДО ЗНАТЬ

ЭНТЕРОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ: ЧТО НАДО ЗНАТЬ

Энтеровирусная инфекция. Название одно, а заболеваний, которые можно отнести к этому типу, — великое множество. О том, что это такое, как передаётся и что делать, если педиатр ставит ребёнку соответствующий диагноз, рассказывает заместитель главного врача Республиканской инфекционный больницы Наталья Зборовская.

Энтеровирусные инфекции у детей – обширная группа заболеваний, вызываемых РНК-содержащими неполиомиелитными вирусами (Коксаки, ECHO, неклассифицированными энтеровирусами человека) и полиовирусом. В силу специфичности вызываемых поражений, полиомиелит стоит несколько обособленно в ряду энтеровирусных инфекций у детей, поэтому рассматривается нами отдельно. В рамках данного обзора остановимся на энтеровирусных инфекциях неполиомиелитной этиологии, распространенных среди детей.

Наряду с ОРВИ, энтеровирусные инфекции встречаются в педиатрии довольно часто. Ежегодно среди общего количества больных энтеровирусной инфекцией удельный вес детей составляет 80-90%; из них половина случаев заболевания приходится на детей младшего возраста. Учитывая полиморфизм клинических проявлений, энтеровирусные инфекции у детей представляют интерес не только для специалистов в области инфекционных болезней, но и неврологии, гастроэнтерологии, кардиологии, офтальмологии, отоларингологии.

Причины энтеровирусной инфекции у детей

Возбудителями энтеровирусных инфекций неполиомиелитной этиологии у детей выступают вирусы Коксаки А (24 серотипа), Коксаки В (6 серотипов), ECHO (34 серотипа) и неклассифицированные энтеровирусы человека 68-71 серотпипов. Всех неполиомиелитных энтеровирусов объединяет устойчивость к низким температурам (замораживанию, оттаиванию) и быстрая инактивация в условиях высокой температуры (при кипячении) или воздействии хлорсодержащих растворов, йода, формалина, перекиси водорода, УФО.

Источниками энтеровирусной инфекции могут служить дети и взрослые, являющиеся вирусоносителями или больными манифестной формой заболевания. Передача инфекции от человека к человеку осуществляется воздушно-капельным или фекально-оральным путями; реже отмечается трансплацентарная передача. Сезонные подъемы заболеваемости энтеровирусными инфекциями среди детей отмечаются в конце лета – начале осени. Наибольшая заболеваемость регистрируется среди детей в возрасте от 3 до 10 лет. Взрослые и дети старшего возраста заболевают реже, что объясняется наличием у них иммунитета, сформировавшегося вследствие бессимптомной инфекции. Наряду со спорадическими случаями и эпидемическими вспышками энтеровирусной инфекции в детских коллективах, встречаются крупные эпидемии, поражающие целые регионы.

Проникновение энтеровирусов в организм происходит через слизистые оболочки пищеварительного и респираторного тракта. Репликация вирусов происходит в лимфоидной ткани, эпителии ротоглотки и ЖКТ, поэтому ранними клиническими проявлениями энтеровирусной инфекции у ребенка могут быть герпетическая ангина, фарингит, диарея и пр. Дальнейшее распространение вирусов по организму происходит гематогенным путем. Обладая органотропностью, энтеровирусы могут поражать нервную ткань, мышцы, покровные ткани, сосуды глаз и т. д. После перенесенной энтеровирусной инфекции у детей формируется типоспецифический иммунитет к тому серологическому типу вируса, которым было вызвано заболевание.

Классификация энтеровирусной инфекции у детей

В зависимости ведущего клинического синдрома, различают типичные и атипичные энтеровирусные инфекции у детей. Типичные формы могут проявляться в виде изолированных или комбинированных поражений: герпетической ангины, катара верхних дыхательных путей, гастроэнтерита, эпидемической миалгии, энтеровирусной лихорадки, энтеровирусной экзантемы, гепатита. Поражение нервной системы при энтеровирусной инфекции у детей может протекать по типу энцефалита, серозного менингита, энцефаломиокардита новорожденных, параличей; поражение сердца – в виде миокардита и перикардита; поражение глаз – в виде геморрагического конъюнктивита и увеита; поражение мочеполовой системы – в форме геморрагического цистита, орхита, эпидидимита. К атипичным формам энтеровирусной инфекции у детей относятся случаи стертого и бессимптомного течения.

С учетом выраженности клинических признаков энтеровирусная инфекция у детей может иметь легкое, среднетяжелое и тяжелое течение. Критериями степени тяжести выступают выраженность местных изменений и интоксикационного синдрома. По характеру течения энтеровирусные инфекции у детей подразделяются на неосложненные и осложненные.

Симптомы энтеровирусной инфекции у детей

Несмотря на полиморфизм клинических проявлений, течению различных энтеровирусных инфекций у детей свойственны некоторые общие черты. Длительность инкубационного периода составляет от 2 до 10 дней (в среднем 2-4 дня). Манифестация заболевания происходит остро, с высокой лихорадки (39-40 °С), озноба, головной боли, слабости, нарушения сна, отсутствия аппетита, повторной рвоты.

При любой форме энтеровирусной инфекции у детей отмечается гиперемия кожи лица, шеи и верхней половины туловища, инъекция сосудов конъюнктивы и склеры. Возможно появление полиморфной пятнисто-папулезной сыпи, гиперемии слизистой миндалин дужек и задней стенки глотки, шейного лимфаденита. Считается, что внутриутробное инфицирование энетровирусами может послужить причиной синдрома внезапной детской смерти. Также доказана связь между энтеровирусной инфекцией у детей и развитием сахарного диабета 1 типа.

Кроме общей симптоматики, в клинике различных форм энтеровирусной инфекции у детей присутствуют свои специфические проявления.

Энтеровирусная лихорадка у детей (малая болезнь, летний грипп, трехдневная лихорадка) вызывается разными серотипами вирусов Коксаки и ECHO. Для инфекции характерна острая манифестация с лихорадки, миалгии, умеренных катаральных явлений. У ребенка выражены общие признаки энтеровирусной инфекции: инъекция сосудов склер, гиперемия лица, увеличение лимфоузлов и др.; может отмечаться увеличение печени и селезенки. Данная форма энтеровирусной инфекции у детей протекает легко, обычно не более 2-4 дней. В редких случаях энтеровирусная лихорадка продолжается 1-1,5 недели или имеет волнообразное течение.

Кишечная (гастроэнтеритическая) форма энтеровирусной инфекции чаще встречается у детей до 3-х лет. Заболевание протекает с незначительными катаральными явлениями (ринитом, заложенностью носа, гиперемией слизистых ротоглотки, кашлем) и диспепсическим синдромом (диареей, рвотой, метеоризмом). Тяжелая интоксикация, дегидратация и явления колита не свойственны. Продолжительность кишечной формы энтеровирусной инфекции у детей составляет 1-2 недели.

Катаральная (респираторная) форма энтеровирусной инфекции у детей протекает по типу ОРЗ. Отмечается кратковременная лихорадка, ринофарингит, ларингит. Возможно развитие синдрома ложного крупа.

Энтеровирусная экзантема, ассоциированная с ECHO и Коксаки-вирусами, характеризуется появлением на высоте лихорадки кожной сыпи. По характеру сыпь может напоминать таковую при скарлатине, кори или краснухе; элементы располагаются преимущественно на коже лица и туловища. Реже встречаются пузырьковые высыпания в полости рта, напоминающие герпес (пузырчатка полости рта). Течение энтеровирусной инфекции у детей благоприятное; сыпь и лихорадка исчезают в течение 1-2 дней.

Эпидемическая миалгия (болезнь Борнхольма, плевродиния) – энтеровирусная инфекция у детей, вызываемая Коксаки и ECHO-вирусами. Ведущим проявлением заболевания служат интенсивные мышечные боли, сопровождающие высокую лихорадку. Чаще дети жалуются на боли в грудной клетке и верхней половине живота, реже – в спине и конечностях. При движении боли усиливаются, вызывая побледнение кожных покровов, обильное потоотделение, тахипноэ. Эпидемическая миалгия требует проведения дифференциальной диагностики с плевритом, острым аппендицитом или перитонитом. Вне болевого приступа дети чувствуют себя значительно лучше. Данная форма энтеровирусной инфекции у детей нередко протекает совместно с герпангиной и серозным менингитом.

Серозный менингит является типичной формой энтеровирусной инфекции у детей. Клиническая картина характеризуется высокой температурой тела, сильной головной болью, повторной рвотой, беспокойством и возбуждением ребенка, бредом и судорогами. Со стороны респираторного тракта отмечаются явления фарингита. С первых дней выражены менингеальные симптомы: положительные симптомы Брудзинского и Кернига, ригидность мышц затылка. Обычно через 3-5 дней симптоматика регрессирует, однако постинфекционная астения и остаточные явления могут сохраняться в течение 2-3 месяцев.

Полиомиелитоподобная (паралитическая) форма энтеровирусной инфекции у детей является одной из наиболее тяжелых. Как и при полиомиелите, повреждение передних рогов спинного мозга может приводить к развитию вялых параличей и парезов нижних конечностей. В легких случаях прихрамывающая походка, слабость в ногах, снижение мышечного тонуса являются обратимыми и постепенно исчезают через 4-8 недель. При тяжелых формах энтеровирусной инфекции у детей возможен летальный исход вследствие нарушением функции дыхательного и сосудодвигательного центров.

Энцефаломиокардит новорожденных вызывается вирусами Коксаки типа В и характерен для недоношенных и детей первых месяцев жизни. На фоне общей симптоматики (вялости, отказа от груди, субфебрилитета) нарастают явления сердечной недостаточности (тахикардия, одышка, цианоз, аритмия, расширение границ сердца и печени). При энцефалите развивается выбухание родничков и судороги. Летальность при данной форме энтеровирусной инфекции среди детей достигает 60-80%.

Геморрагический конъюнктивит вызывается энтеровирусом типа 70. Проявляется светобоязнью, слезотечением, ощущением инородного тела в глазах. Объективно определяются отек и гиперемия конъюнктивы, точечные кровоизлияния. При присоединении вторичной инфекции может развиваться бактериальный конъюнктивит, кератит. Обычно все симптомы энтеровирусной инфекции у детей стихают через 10-14 дней.

Энтеровирусный увеит преимущественно поражает детей 1-го года жизни. Данная форма энтеровирусной инфекции протекает с лихорадкой, интоксикацией, кишечным и респираторным синдромом. Поражение сосудистой оболочки глаза носит стойкий характер и может привести к дистрофии радужки, помутнению роговицы, развитию увеальной катаракты и глаукомы, субатрофии глазного яблока.

Особенности течения герпетической ангины проанализированы в соответствующем обзоре.

Диагностика энтеровирусной инфекции у детей

Энтеровирусные инфекции у детей диагностируются на основании типичного симптомокомплекса с учетом сезонности и эпидемиологических данных. Обязательным для установления диагноза является лабораторное подтверждение энтеровирусной инфекции у детей: обнаружение РНК энтеровируса методом ПЦР, определение титра специфических антител с помощью ИФА, РСК или РПГА и др.

Лабораторная верификация возбудителей может проводиться в различных биологических жидкостях: в крови, отделяемом конъюнктивы, смыве из носоглотки, соскобах с кожных высыпаний, образцах фекалий, спинномозговой жидкости (при наличии показаний для люмбальной пункции), биоптатах органов и др.

В зависимости от ведущего клинического синдрома дети могут нуждаться в консультации педиатра, детского кардиолога, детского невролога, детского отоларинголога, детского офтальмолога и др. специалистов. Различные формы энтеровирусной инфекции у детей требуют проведения дифференциальной диагностики с полиомиелитом, корью, краснухой, скарлатиной, эпидемическим паротитом, ОРВИ, ОКИ.

Лечение энтеровирусной инфекции у детей

Лечение легких изолированных форм энтеровирусной инфекции у детей проводится амбулаторно; госпитализация требуется при серозном менингите, энцефалите, миокардите, тяжелых комбинированных поражениях. В лихорадочном периоде показаны покой, постельный режим, достаточный питьевой режим.

Этиопатогенетическая терапия энтеровирусной инфекции у детей включает применение рекомбинантных интерферонов (альфа интерферона), интерфероногенов ( оксодигидроакридинилацетата, меглюмина акридонацетата), полиспецифических иммуноглобулинов (при тяжелом течении).

При миокардите, менингите и др. формах показано назначение глюкокортикостероидов. Одновременно проводится симптоматическое лечение (прием жаропонижающих, дезинтоксикационная терапия, орошение полости носа, полоскание зева и др.).

Прогноз и профилактика энтеровирусной инфекции у детей

В большинстве случаев энтеровирусная инфекция у детей заканчивается реконвалесценцией. Наиболее серьезными в отношении прогноза являются энтеровирусные энцефалиты, энцефаломиокардиты новорожденных, менингиты, генерализованная инфекция, присоединение бактериальных осложнений.

Дети, заболевшие энтеровирусной инфекцией, подлежат изоляции; на контактных лиц накладывается карантин на 2 недели. В эпидемиологическом очаге проводятся дезинфекционные мероприятия. Ввиду большого разнообразия энтеровирусов специфическая вакцина против инфекции не разработана. Неспецифическая профилактика включает эндоназальную инстилляцию лейкоцитарного интерферона детям и взрослым, контактировавшим с больным энтеровирусной инфекцией.

Чем лечить стоматит у ребенка?

Стоматит у детей

Стоматит — это воспаление во рту ребенка, которое может вызвать язвы на языке, деснах, щеках и горле. Эта ситуация чаще встречается у детей в возрасте до 3 лет, но может возникать и в подростковом возрасте. В большинстве случаев стоматит вызывается вирусом герпеса, и называется в этом случае герпетический гингивостоматит.

Лечение проводится по назначениям педиатра, который рекомендует всегда держать рот ребенка в чистоте, а также использовать лекарства для облегчения симптомов и в некоторых случаях для снятия дискомфорта.

Что может вызвать стоматит у детей?

Стоматит может возникать по нескольким причинам, однако наиболее частыми причинами являются:

  • снижение защитных сил иммунной системы,
  • привычка класть в рот грязные руки и предметы (игрушки),
  • в результате заражения вирусами гриппа, простого герпеса или ветряной оспы, Коксаки, энтеровирусами,
  • кандидоз (молочница).

Другими возбудителями являются бактерии и грибки. Также причиной могут быть температурные ил механические травмы ротовой полости, аллергические реакции. Свою роль играют дефицит витаминов B или C.

Основные симптомы

Детский стоматит обычно проявляется такими симптомами как раздражительность и плохой аппетит, потому что, когда пища попадает на ранку, она вызывает боль. Другие симптомы, которые могут возникнуть при стоматите:

  • Язвы во рту или воспаление десен;
  • Боль во рту и горле при глотании;
  • Может быть температура выше 38 ° C;
  • Раны на губах;
  • Неприятный запах изо рта.

Эти симптомы могут появиться одновременно, но чаще всего появляются только язвы. Помимо стоматита, существуют и другие заболевания, которые могут вызывать язвы во рту, например, вирус Коксаки, вызывающий ящур ротовой полости. Поэтому важно, чтобы педиатр вовремя оценил симптомы и сделал анализы, чтобы правильно поставить диагноз.

Что наблюдается во рту ребенка при стоматите?

При осмотре могут наблюдаться болезненные эрозии, язвы и волдыри на слизистой внутренней поверхности щек, десен, губ, языка и, реже, в задней части глотки. Увеличение лимфоузлов на шее и под нижней челюстью также является обычным явлением.

Десны могут быть слегка опухшими, красными, изъязвленными и легко кровоточить.

Когда причина заболевания — вирусная, поражения полости рта могут длиться от 7 до 10 дней, хотя общие симптомы исчезают раньше.

Можно ли легко диагностировать возбудителя?

Можно провести микробиологическое исследование, но используемые методы не просты.

Образцы необходимо транспортировать и культивировать в подходящей среде. Результаты будут получены примерно через 15 дней. Доступны также методы быстрой диагностики, такие как прямое окрашивание содержимого везикул флуоресцентными антителами.

Есть ли какое-то конкретное лечение?

Лечение стоматита должно быть назначено педиатром или стоматологом и длиться около 2 недель. При этом важно соблюдать осторожность с пищей, которую ест ребенок, и поддерживать надлежащую гигиену полости рта, чтобы избежать размножения микроорганизмов в язве.

Чаще всего гингивостоматит проходит спонтанно и требует только симптоматического лечения боли или антисептических средств, которые помогают местному заживлению. У детей следует уделять особое внимание их гидратации, предлагая им жидкости в дробном виде, холодные или комнатной температуры. Необходимо избегать кислых, соленых или богатых специями продуктов.

Дискомфорт можно уменьшить с помощью парацетамола или ибупрофена, принимаемых внутрь. При подозрении на дрожжевую инфекцию обычно эффективно местное применение или полоскания с противогрибковыми средствами. В некоторых случаях может быть рекомендовано использование противовирусных препаратов, таких как ацикловир, в случае гингивостоматита, вызванного вирусами герпеса. Это лекарство помогает заживлять раны во рту, но его следует использовать только по рецепту педиатра. Терапия герпесной инфекции ацикловиром не требуется при легком течении инфекции у детей с достаточно сильным иммунитетом.

Как кормить младенца или ребенка со стоматитом?

Важно, чтобы кормление ребенка не прерывалось при наличии заболевания. Однако важно соблюдать осторожность, чтобы избежать отягчающих симптомов:

  • Избегайте кислых продуктов, таких как апельсин, киви или ананас;
  • Предлагайте холодные жидкости, например фруктовые соки или смузи;
  • Употребление протертых или жидких продуктов, например супов;
  • Отдайте предпочтение холодным продуктам, таким как йогурт, фруктовые компоты и желатин.
Как можно предотвратить стоматиты?

Инфекции, вызванные вирусом простого герпеса, часто возникают у школьников. Большинство этих инфекций протекает бессимптомно, вирус выделяется со слюной при отсутствии клинических проявлений заболевания. Дети с таким заболеванием должны оставаться дома до конца лечения.
Лучшая форма профилактики — строгое мытье рук, избегание прямого телесного контакта с другими людьми и отказ от совместного использования стаканов или посуды.

Вирус Коксаки: как не заболеть и что делать, если это всё-таки произошло

Что такое вирусы Коксаки

Вирусы Коксаки — это представители рода энтеровирусов, то есть вирусов, которые особенно активно размножаются в желудочно‑кишечном тракте (entero в переводе с латыни — «кишечник»). Чаще всего инфекция поражает детей в возрасте до 5 лет. Но пострадать от вирусной атаки могут и подростки, и взрослые.

Впервые возбудителя обнаружили в 1940‑х годах у детей из американского города Коксаки. Место и дало инфекции имя.

Близкие родственники вирусов Коксаки — возбудители полиомиелита и гепатита А. Несмотря на такие связи, Коксаки в большинстве случаев не представляет серьёзной угрозы для здоровья. Хотя иногда симптомы этой инфекции могут напугать.

Каковы симптомы вируса Коксаки

Признаки заражения вирусами Коксаки возникают внезапно, как при гриппе. К ним относятся :

  • Резкое повышение температуры (выше 38 °C).
  • Головокружение, головная боль.
  • Боль в горле.
  • Болезненные ощущения в мышцах и суставах.
  • Высыпания. Это наиболее характерный симптом, но часто он появляется лишь на второй‑третий день заболевания. Сыпь концентрируется на ладонях и внутренней поверхности рук, подошвах, вокруг рта. Также болезненные красные волдыри могут возникать на дёснах, языке, нёбе, внутренней поверхности щёк, миндалинах.
Фото: kipgodi/Shutterstock

Посмотреть, как выглядит сыпь

Закрыть

Так выглядит классическая инфекция, вызванная вирусами Коксаки. Однако в каждом конкретном случае болезнь протекает по своему сценарию. У маленького ребёнка может просто повыситься температура — и эта лихорадка будет единственным признаком. По данным Роспотребнадзора, от 50% до 85% случаев заражения вирусами Коксаки вообще протекают бессимптомно.

Сейчас читают 🔥

Чем опасны вирусы Коксаки и когда надо обращаться к врачу

Как мы уже сказали, чаще всего вирусы Коксаки не опасны. Но при подозрении на эту инфекцию лучше всё же проконсультироваться с педиатром (или терапевтом). Дело в том, что в редких случаях болезнь может вызвать серьёзные осложнения:

  • Вирусный менингит. Это заболевание, при котором воспаляются оболочки головного или спинного мозга.
  • Энцефалит. Так называется воспаление различных участков головного мозга.
  • Миокардит. Он же — воспаление сердечной мышцы.

Если дело доходит до осложнений (ещё раз сделаем акцент: это случается очень редко), симптомы вируса Коксаки становятся более выраженными. Немедленно обращайтесь к врачу или даже вызывайте скорую помощь, если вы наблюдаете сразу несколько из перечисленных ниже признаков :

  • температура превышает 38 °C у ребёнка младше 6 месяцев или 38,8 °C у детей старшего возраста;
  • на фоне лихорадки резко падает аппетит, возникают проблемы с кормлением;
  • появились рвота или понос;
  • есть проблемы с дыханием: ребёнок дышит чаще, чем обычно, или хватает воздух открытым ртом;
  • имеют место жалобы на боль в груди или животе;
  • присутствует сильная боль в горле;
  • есть сильная головная боль — особенно если она сопровождается рвотой, сонливостью, спутанностью сознания;
  • на месте сыпи во рту или на коже возникли раны;
  • глаза покраснели, выглядят отёчными;
  • есть так называемая ригидность мышц шеи: они напряжены, ребёнку больно поворачивать голову;
  • мальчик жалуется на боль в одном или обоих яичках.

Как лечить вирус Коксаки

Если есть осложнения, пациента направляют в стационар. Если же речь идёт о классическом вирусе Коксаки, то лечения как такового нет. Таблеток против вирусных инфекций не существует, антибиотики в данном случае бесполезны, так что организм должен справиться с заболеванием самостоятельно.

Как правило, температура спадает в течение 1–3 дней, а другие симптомы полностью исчезают через неделю.

Чтобы облегчить состояние ребёнка (или заболевшего взрослого), врачи рекомендуют :

  • Отдыхать. На время болезни стоит отказаться от физических нагрузок.
  • Больше пить. В первые дни заболевания человек обильно потеет и может отказываться от питья из‑за боли в горле. Это опасно обезвоживанием. Поэтому нужно уговаривать пить.
  • При необходимости принимать безрецептурные обезболивающие средства. Какие именно — посоветуйтесь с педиатром или терапевтом. Это важно, поскольку, например, популярные препараты на основе ибупрофена не рекомендуются при инфекциях, сопровождающихся высыпаниями.

Как не заболеть вирусом Коксаки

Этот недуг относится к болезням «немытых рук». Заражение чаще всего происходит, когда в рот попадает предмет,  загрязнённый вирусами Коксаки. Это могут быть немытые пальцы, фрукты, овощи, другая еда. Кроме того, вирусы неплохо выживают в тёплой воде, поэтому подцепить их можно, случайно хлебнув жидкости, например, из бассейна или чужой чашки.

Вирусы Коксаки очень заразны. Единственная защита от них — соблюдение правил гигиены.

  • Чаще мойте руки с мылом и водой. На эту процедуру должно уходить не менее 20 секунд. Особенно важно это делать в общественных местах, после посещения туалета и смены подгузников, а также перед едой.
  • Старайтесь не касаться глаз, носа и рта немытыми руками.
  • Избегайте тесных контактов, таких как поцелуи и объятия, и не ешьте из одной посуды с людьми, в здоровье которых вы не уверены.
  • Тщательно мойте фрукты и овощи перед употреблением.
  • Ни в коем случае не хватайте ртом воду в бассейнах и других водоёмах и запретите это делать детям.

Читайте также 💉🤒💊

Как уберечься от вируса Коксаки, рассказывает врач Анастасия Шуркевич

В разгар летнего сезона 2017 года появились сообщения о первых заболевших туристах вирусом Коксаки, а к осени количество инфицированных в Турции увеличилось. Роспотребнадзор открыл горячую интернет-линию, в начале сентября на неё поступило 800 жалоб. Вспышки вируса Коксаки чаще возникают в теплое время, поэтому заболевания еще называют «летним гриппом», и легче всего им заразиться можно в отелях и в бассейнах. Данный вирус встречается повсеместно, и это совсем не зависит от уровня экономического развития страны.

Наталья Квашина

11:54, 02 октября 2017

«Чаще всего люди заражаются вирусом Коксаки через загрязнённые продукты, предметы быта, либо воду. Инфекция также может передаваться воздушно-капельным путем от вирусоносителя к здоровому человеку», — рассказывает эксперт муниципальной аптечной сети, врач-терапевт Анастасия Шуркевич.

Вирус Коксаки — это группа из 30 активных энтеровирусов, которые размножаются в желудочно-кишечном тракте ребёнка. Впервые заболевание было диагностировано в маленьком городке США. 

Заболевание встречается у детей до 10 лет и крайне редко у взрослых. Входными воротами для вируса Коксаки служат слизистые оболочки полости носа, ротоглотки и тонкого кишечника. Проникнув в организм, на третьи сутки он выходит в кровоток.

«Затем у пациента начинается повышение температуры до 39-40 градусов, при этом возможна многократная рвота, диарея, появление сыпи на руках, ногах, на груди, на лице. Пациент ощущает головную боль, слабость. Но если это ребёнок, ему достаточно сложно. Он становится вялым, апатичным, квёлым. Поражаются слизистые глотки, и в связи с этим возникают затруднения в приёме пищи. При стандартном течении болезни её симптомы исчезают за одну-две недели», — добавляет Анастасия Шуркевич.

Бывает, что болезнь протекает с осложнениями. Одна из тяжелых форм вируса Коксаки — менингеальная, с поражением центральной нервной системы. Для неё характерна сильная головная боль, светобоязнь, спутанность сознания, рвота и тяжёлая лихорадка. 

Стандартных схем лечения вируса Коксаки не существует, потому что лечение, как правило, симптоматическое. Разработка вакцины пока не даёт положительных результатов. Если вы всё же заболели, обратитесь к врачу и не занимайтесь самолечением.

«Профилактика вирусов Коксаки на курортах, особенно в жарких странах, сводится, в первую очередь, к потреблению качественной, бутилированной воды. Здесь акцент идёт на бассейны, где ребёнок может плавать и, сам того не заметив, проглотить небольшое количество воды. Продукты питания: сильная жара не способствует длительному хранению, и те сроки годности, которые могут быть указаны в условиях жарких стран, не соответствуют действительности.

Немаловажную роль играет качество и чистота продуктов. Перед употреблением следует промывать фрукты и овощи, если это возможно, и обязательно мыть руки. С собой можно носить салфетки с дезинфицирующими свойствами, также носить с собой лосьоны для обработки рук. Более того, беречь детей от тепловых и солнечных ударов, потому что это способствует снижению иммунитета», — советует врач Анастасия Шуркевич.

#Будьте здоровы #Городская волна #Здравоохранение

Подписывайтесь на наши соц.сети

Вирус Коксаки B — Фонд безопасной питьевой воды

Что такое вирус Коксаки B?

Вирус Коксаки был впервые выделен в Коксаки, штат Нью-Йорк, в 1948 году. Существует шесть
различных вирусов Коксаки B, каждый из которых отвечает за различные симптомы и заболевания.
Вирусы Коксаки B являются причиной многочисленных случаев инфекций центральной нервной системы
у младенцев и детей, а также инфекций сердечной мышцы как у детей
, так и у взрослых. Эти вирусы являются наиболее частым возбудителем миокардита (воспаление
мышечных стенок сердца) и дилатационной кардиомиопатии (группа заболеваний
, при которых сердечная мышца ослаблена и не может эффективно перекачивать кровь, что приводит к расширению камер сердца
).

Каковы симптомы и время инкубации?

Человеческие инфекции, вызванные вирусом Коксаки B, распространены и часто протекают бессимптомно (без симптомов). Болезни могут вызывать симптомы, варьирующиеся от легких желудочно-кишечных расстройств (заболевания желудка или кишечника) до паралича, сердечных повреждений и врожденных дефектов, хотя субклинические и легкие инфекции являются наиболее распространенными. Для заражения вирусом Коксаки B характерны: лихорадка, утомляемость, недомогание (дискомфорт в теле) и боли в груди.Время инкубации большинства вирусов Коксаки составляет 2-10 дней, а симптомы со стороны сердца обычно возникают примерно через две недели после вирусной инфекции.

Coxsackie B отвечает за начало многих заболеваний, некоторые из которых включают: простуду, плевродинию (внезапные приступы боли и болезненности мышц между ребрами), асептический менингит (воспаление оболочек, окружающих мозг и спинной мозг). пуповина), инфекции верхних дыхательных путей (носоглотка, ротовая полость и горло), миокардит и перикардит (воспаление перепончатого мешка, который окружает и защищает сердце).Также известно, что вирусы Коксаки B вызывают: энцефалит (воспаление головного мозга), вялый моторный паралич (паралич с потерей мышечного тонуса), экзантему (появление высыпаний на коже), сыпь, пневмонию (воспаление легких) и генерализованное заболевание новорожденного.

Как долго длятся симптомы?

Продолжительность действия вируса Коксаки варьируется и зависит от конкретного типа инфекции. При лихорадке Коксаки без каких-либо других симптомов температура тела обычно возвращается к норме в течение трех-пяти дней.При плевродинии жар и мышечные боли обычно продолжаются от одного до двух дней.

Как диагностируется?

Врачи диагностируют вирус Коксаки, проводя обследование и проверяя характерные симптомы болезни. Кал и жидкости из задней стенки глотки также могут быть проверены, чтобы определить, присутствует ли вирус.

Могу ли я серьезно заболеть?

Инфекция сердца вирусом Коксаки B может привести к вирусному миокардиту — воспалительному заболеванию сердца, которое может вызвать сердечную недостаточность.Заболевание обычно не приводит к смерти, но может произойти необратимое повреждение сердца. Обычно нет долгосрочных осложнений от легких заболеваний / симптомов, вызванных вирусом Коксаки B. Однако некоторые пациенты с параличом могут не полностью выздороветь. Тем, у кого из-за миокардита развивается дилатационная кардиомиопатия (сердечная недостаточность), потребуется длительный уход за своими симптомами.

Вирус Коксаки: диагностика, лечение и профилактика

Введение:

Позднее лето или начало осени … Еще не сезон простуд и гриппа, но ваш ребенок болен.Рассмотрим вирус Коксаки. Несмотря на то, что это очень частая причина заражения детей, ей уделяется мало внимания. Часто виновником является то, что родители уходят от врача, не зная, чем болен их ребенок.

Что такое вирус Коксаки?

Вирусы Коксаки, семейство энтеровирусов, могут вызывать удивительное разнообразие различных заболеваний. Общее у этих вирусов то, что они поражают кишечник (и стул) человека, но они могут вызывать симптомы по всему телу.

Кто заражается вирусом Коксаки?

Инфекции, вызванные вирусом Коксаки, чаще всего встречаются у маленьких детей, но с некоторой частотой наблюдаются до полового созревания. Взрослые могут заразиться, но это случается гораздо реже. Если у людей есть определенный штамм вируса Коксаки, они, как правило, становятся невосприимчивыми, но они могут заболеть одним из других штаммов. Около полдюжины штаммов ответственны за большинство заболеваний, вызванных вирусом Коксаки. Большинство случаев заражения происходит летом или ранней осенью, с пиком с августа по октябрь в северном полушарии.

Каковы симптомы?

Самая известная из инфекций, вызываемых вирусом Коксаки, — это болезнь рук-ящура , обычно вызываемая вирусом Коксаки А16. Несколько других инфекций, вызванных вирусом Коксаки, довольно распространены. Большинство из них иногда сопровождается сыпью или экзантемой. Все они имеют короткий инкубационный период, от 4 до 6 дней с момента воздействия до появления симптомов.

Неспецифическая лихорадка. У детей, инфицированных вирусом Коксаки, обычно возникает внезапная лихорадка, которая длится около 3 дней.Иногда лихорадка проявляется двумя волнами: она держится день или около того, исчезает на пару дней, а затем возвращается примерно на 3 дня. Некоторые дети также жалуются на головную боль, мышечные боли, першение в горле или снижение аппетита. Иногда у них жидкий стул или даже небольшая рвота, но, помимо лихорадки, другие симптомы обычно нечеткие. Вся болезнь обычно длится от 1 до 6 дней.

Герпетическая ангина. Эта болезненная инфекция ротовой полости чаще всего вызывается вирусами Коксаки.Основные симптомы — волдыри во рту и жар. Обычно это длится от 3 до 6 дней.

Респираторная инфекция. Когда эти вирусы попадают в дыхательные пути, они могут проявляться по-разному, включая простуду, круп, бронхит, пневмонию, инфекционную астму (кратковременное свистящее дыхание) или колющую боль в груди при глубоком дыхании. Большинство болезней длятся от 3 до 6 дней и сопровождаются повышением температуры тела.

Желудочно-кишечная инфекция. Иногда рвота, диарея или боль в животе являются основными признаками инфекции, вызванной вирусом Коксаки.Диарея не кровянистая и обычно не водянистая. Обычно у детей бывает от шести до восьми жидких стульев в день. Большинство болезней длятся от 3 до 6 дней и сопровождаются повышением температуры тела.

Инфекция без симптомов. У многих детей, инфицированных вирусом Коксаки, симптомы отсутствуют. Тем не менее, эти дети могут продолжать выделять вирус через стул в течение нескольких месяцев.

Другое. Реже вирусы Коксаки могут вызывать инфекции мышц, суставов, сердца, яичек, нервов или головного мозга. Несмотря на то, что эти инфекции более серьезны, большинство детей полностью выздоравливают.

Как диагностируется вирус Коксаки?

Обычно диагноз ставится на основании анамнеза и физического осмотра. Поскольку симптомы очень разнообразны, диагностика может быть довольно сложной. Время года, воздействие в сообществе, инкубационный период и специфические симптомы иногда проясняют это. Лабораторные тесты доступны на вирусы Коксаки и другие энтеровирусы, но обычно в них нет необходимости.

Как лечится вирус Коксаки?

Антибиотики не помогают при инфекциях, вызванных вирусом Коксаки.Важными вопросами являются обеспечение детей большим количеством жидкости, облегчение их боли и лечение других их симптомов, если это необходимо.

Как можно предотвратить вирус Коксаки?

Вирусы Коксаки присутствуют как в кале, так и в респираторных секретах. Они могут передаваться фекально-оральным путем, воздушно-капельным и контактным путем. Очищение рук — особенно после пеленания / посещения туалета и перед едой — может помочь уменьшить их распространение. Дети часто не посещают школу или детский сад в течение первых нескольких дней после болезни, но неясно, как предотвратить заражение других.Другие дети в классе, вероятно, заразны, хотя у них никогда не разовьются симптомы.

Влияние ювенильной инфекции Коксаки на клетки-предшественники сердца и постнатальное развитие сердца

Abstract

Вирус Коксаки B (CVB) — это энтеровирус, который чаще всего вызывает самоограниченное лихорадочное заболевание у младенцев, но в случаях тяжелой инфекции может проявляться острый миокардит. Хронические последствия легкой инфекции CVB неизвестны, хотя существует эпидемиологическая связь между ранними субклиническими инфекциями и поздней сердечной недостаточностью, что повышает вероятность незначительного повреждения, ведущего к дисфункции с поздним началом, или хронического продолжающегося повреждения из-за воспалительных реакций во время латентной инфекции.Здесь мы описываем мышиную модель ювенильной инфекции с субклинической дозой вируса Коксаки B3 (CVB3), которая не показала явных симптомов ни сразу после заражения, ни у взрослых мышей. Однако после физиологического или фармакологически индуцированного сердечного стресса у взрослых мышей, инфицированных несовершеннолетними, наблюдалась гипертрофия и расширение сердца, что свидетельствует о прогрессировании сердечной недостаточности. Оценка сосудистой сети в сердцах взрослых мышей, подвергшихся сердечному стрессу, показала компенсаторное увеличение образования кровеносных сосудов CD31 + , хотя этот эффект подавлялся у мышей, инфицированных молодью.Более того, CVB3 эффективно инфицировал ювенильные клетки c-kit + , и количество сердечных клеток-предшественников было снижено в сердцах взрослых мышей, инфицированных ювенильными клетками. Эти результаты предполагают, что истощенный пул сердечных клеток-предшественников после ювенильной инфекции CVB3 может ухудшить способность сердца увеличивать плотность капилляров, чтобы адаптироваться к повышенной нагрузке.

Сведения об авторе

Вирус Коксаки B (CVB) — серьезный патоген для человека, вызывающий миокардит, асептический менингит и энцефалит.Долговременные последствия ювенильной инфекции CVB для развивающегося хозяина еще предстоит должным образом изучить. Здесь мы показываем, что CVB эффективно инфицировал ювенильные кардиальные клетки-предшественники как в культуре, так и в молодом сердце. Кроме того, мы описываем мышиную модель ювенильной инфекции с субклинической дозой CVB, которая не показывала никаких симптомов заболевания во взрослом возрасте. Однако после физиологического или фармакологически индуцированного сердечного стресса у ювенильных инфицированных мышей наблюдалась сердечная гипертрофия и дилатация, свидетельствующие о прогрессировании сердечной недостаточности.Эти результаты предполагают, что легкая инфекция CVB у молодого хозяина может нарушить способность сердца адаптироваться к повышенной нагрузке, что приводит к патологическому ремоделированию позже во взрослой жизни.

Образец цитирования: Sin J, Puccini JM, Huang C, Konstandin MH, Gilbert PE, Sussman MA, et al. (2014) Влияние ювенильной инфекции Коксаки на клетки-предшественники сердца и постнатальное развитие сердца. PLoS Pathog 10 (7): e1004249. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249

Редактор: Thomas E. Lane, Университет Юты, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 9 декабря 2013 г .; Одобрена: 29 мая 2014 г .; Опубликован: 31 июля 2014 г.

Авторские права: © 2014 Sin et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была поддержана Национальными институтами здравоохранения (NIH) R01 Award NS054108 (для РФ), NIH R01 Award HL092136 (для RAG), Премия SDSU University Grants Program Award (для РФ) и Национальными институтами Программы поддержки инфраструктуры исследований меньшинств (M-RISP) в области психического здоровья (NIMH) R24 Faculty Fellow Award MH065515 (в РФ). JMP является получателем стипендии фонда «Награды за достижения для ученых колледжей» (ARCS). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Вирусы Коксаки (CV) являются распространенными патогенами человека, которые обычно вызывают самоограничивающуюся инфекцию и легкие симптомы, такие как лихорадка, сыпь и осложнения со стороны верхних дыхательных путей. Хотя сердечно-сосудистые заболевания также могут вызывать тяжелые воспалительные заболевания, включая миокардит, заболевание, которое может приводить к дилатационной кардиомиопатии [1], [2], [3], проявление фенотипа сердечного заболевания, как документально подтверждено, встречается крайне редко (~ 5% случаев). инфицированные пациенты) [4].Коллапс и смерть молодых людей во время физических нагрузок могут быть результатом катастрофической дисфункции электрических путей в сердце, связанной с невыявленной сердечно-сосудистой инфекцией [5], [6]. Кроме того, у 70–80% людей с терминальной идиопатической дилатационной кардиомиопатией обнаруживаются уровни CV-РНК в миокарде без предшествующего вирусного миокардита в анамнезе [7], [8], [9]. Эти результаты повышают вероятность того, что легкая инфекция ССЗ может вызвать незаметное, но длительное повреждение, хотя неясно, является ли такое стойкое повреждение иммуно-опосредованным или обусловленным вирус-опосредованными цитопатическими эффектами.Предыдущие исследования предполагают, что вирус Коксаки B3 (CVB3) может проявлять уникальный тропизм для недифференцированных клеток, таких как нервные и гематопоэтические клетки-предшественники, тем самым изменяя приверженность клеточного клона или уменьшая их восстановительную способность [10], [11], [12], [13], [ 14], [15], [16], [17]. Инфекция клеток-предшественников может также усиливать распространение вируса в процессе, называемом опосредованным аутофагосомами выходом без лизиса (AWOL) [18], [19]. Основываясь на этих наблюдениях, мы предположили, что CVB3 также инфицирует сердечные клетки-предшественники, что может привести к долгосрочным последствиям для развития и функции сердца.Следует отметить, что механистическая основа и причинная связь между ювенильной инфекцией CVB3 и дилатационной кардиомиопатией у взрослых ранее не изучались.

Сердце ранее рассматривалось как окончательно дифференцированный орган, преимущественно состоящий из фиксированного количества невозобновляемых кардиомиоцитов. Недавно была идентифицирована особая популяция резидентных сердечных клеток-предшественников (CPC), которые ставят под сомнение представление о сердце без регенеративной способности. Эти CPC были описаны как имеющие большие ядра, скудную цитоплазму и гематопоэтические маркеры, такие как CD117 (c-Kit) и Sca-1 [20], [21], [22], [23].Клетки c-kit + , выделенные из сердца и выращенные в культуре, способны дифференцироваться во все четыре типа клеток сердечной линии, которые включают кардиомиоциты, клетки гладкой мускулатуры, эндотелиальные клетки и фибробласты. CPC также играют полезную роль в восстановлении сердца взрослых, и было показано, что местная инъекция изолированных CPC сохраняет мышечную массу миокарда и уменьшает образование рубцов после экспериментального инфаркта миокарда у мышей [24].

Из-за их роли в развитии сердца, а также в поддержании сердца, нарушение пула CPC из-за инфекции или других факторов окружающей среды, вероятно, может иметь пагубные последствия для развивающегося сердца.Ранее Хуанг и др. Продемонстрировали, что у детенышей мышей воздействие химиотерапевтического препарата доксорубицин до 21 дня постнатального развития приводило к снижению количества CPC из-за раннего старения. Хотя животные, получавшие доксорубицин, демонстрировали нормальную сердечную функцию в возрасте 8 недель, упражнения на выносливость приводили к развитию патологической гипертрофии и фиброза [25]. Эта модель, по-видимому, отражает поздние последствия кардиотоксичности, вызванной доксорубицином в детстве, наблюдаемые у людей, которые проявляются в ослаблении миокарда, ослаблении работы сердечной помпы и прогрессировании в сторону застойной сердечной недостаточности.Поскольку в предыдущих исследованиях описывалась преимущественная инфекция CVB3 клеток-предшественников в ЦНС [10], [11], [15], [16], [26] и костном мозге [17], мы исследовали влияние CVB3 на CPC в развивающихся сердце. Мы создали модель ювенильной инфекции CVB3 на мышах и наблюдали, что не только CVB3 продуктивно инфицировал CPC, но и инфекция вызывала устойчивое снижение пула CPC во взрослом возрасте. Мы предполагаем, что истощение CPC в сердце предрасполагает взрослое животное к вызванной стрессом гипертрофии сердца, дилатации левого желудочка и накоплению фиброзной ткани — признакам, которые считаются ранними стадиями дилатационной кардиомиопатии.Эти результаты свидетельствуют о том, что легкая инфекция CVB3 может предрасполагать сердце к патологическому ремоделированию в более позднем возрасте.

Результаты

CVB3 инфицированный c-kit из сердца

+ клеток, выращенных в культуре

Ранее мы определили, что пролиферирующие нервные стволовые клетки и клетки-предшественники, выросшие в субвентрикулярной зоне неонатального мозга или выращенные в культуре, были преимущественно нацелены на CVB3 [10], [11], [16], [14], [26]. Кроме того, CVB3 снижает уровни нейрогенеза и изменяет развитие мозга в неонатальной модели вирусной инфекции [15].Чтобы исследовать, инфицированы ли CVB3 сердечные клетки-предшественники (CPC) аналогичным образом, клетки c-kit + выделяли из молодых (17 день после рождения) или взрослых мышей и культивировали на предметных стеклах с полной средой для выращивания CPC. Культивируемые клетки c-kit + , полученные из сердца, были инфицированы eGFP-CVB3 при множественности инфицирования (MOI) 1 или 1000. Продукция инфекционного вируса определялась с помощью анализа бляшек или экспрессии вирусного белка (eGFP) с использованием флуоресцентной микроскопии. до 10 дней после заражения (PI) ( Рисунок 1 ).Наши результаты показали, что ювенильные клетки c-kit + экспрессировали высокие уровни вирусного белка (eGFP) с низким и высоким MOI ( , рисунок 1A, ). Кроме того, ювенильные клетки c-kit + продуцировали большое количество инфекционного вируса ( Рисунок 1B ). Напротив, взрослые клетки c-kit + не смогли экспрессировать детектируемые уровни вирусного белка или значительные количества инфекционного вируса. Эти различия согласуются с клиническими исследованиями, предполагающими, что младенцы гораздо более восприимчивы к инфекциям CVB3, чем взрослые [27], [28], [29].По мере развития инфекции большинство ювенильных клеток c-kit + проявляли цитопатические эффекты, отделялись от поверхности культуральной чашки и фрагментировались на апоптотические тельца. Тем не менее некоторые ювенильные клетки c-kit + пережили первоначальную инфекцию и продолжали размножаться в культуре.

Рисунок 1. CVB3 продуктивно инфицированные ювенильные клетки c-kit +, полученные из сердца, выращенные в культуре и в ювенильном сердце.

c-kit Клетки + выделяли из сердца ювенильных или взрослых мышей и размножали в культуре. (A) Клеточные культуры инфицировали eGFP-CVB3 (moi = 1 или 1000), и инфицированные культуры наблюдали с помощью флуоресцентной микроскопии в течение 10 дней. (B) Титры вирусов определяли из супернатантов инфицированных клеточных культур в течение 10 дней PI. (C) Ювенильные клетки c-kit + , инфицированные eGFP-CVB3 (зеленый), фиксировали в 2% параформальдегиде и окрашивали иммуноцитохимическим методом с использованием антитела против c-kit (красный). (D) Ювенильные и взрослые клетки c-kit + окрашивали иммуноцитохимическим методом с использованием антитела против рецептора Коксаки и аденовируса (CAR, красный). (E) Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали, и сердца выделяли через 2 дня ИП. Залитые парафином срезы сердечной ткани депарафинизировали и окрашивали с использованием антител против c-kit (красный) и GFP (вирус, зеленый). Многие инфицированные вирусом клетки c-kit + наблюдались в срезах сердца (белые стрелки). (F) Также было показано, что клетки Sca-1 + (зеленые) в сердечной ткани инфицированы eGFP-CVB3 (красный).Показаны репрезентативные изображения трех инфицированных мышей.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g001

Совместная локализация экспрессии c-kit и вирусного белка в культивируемых CPC, инфицированных eGFP-CVB3, была идентифицирована с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии ( Рисунок 1C ). Кроме того, мы наблюдали популяцию ювенильных клеток c-kit + с низкой экспрессией eGFP, которые оставались морфологически нормальными. В более поздние моменты времени eGFP не был обнаружен, и инфицированные культуры приобрели уплощенную морфологию, совместимую с дифференцировкой (данные не показаны).Напротив, взрослые клетки c-kit + практически не продуцируют инфекционный вирус и оказались устойчивыми к инфекции. И ювенильные, и взрослые популяции клеток c-kit + экспрессировали высокие уровни рецептора Коксаки и аденовируса (CAR) ( Рисунок 1D ), что позволяет предположить, что уровни вирусных рецепторов не были ответственны за различную восприимчивость к инфекции. Эти результаты совпадают с нашими выводами относительно инфекции в ЦНС новорожденных, в результате чего экспрессия CAR широко распространена, однако тропизм вируса специфичен для пролиферирующих NPSCs в начале после инфицирования [10], [11].Присутствие CAR на взрослых клетках c-kit + предполагает, что факторы, отличные от экспрессии CAR, могут в конечном итоге быть ответственными за повышенную чувствительность ювенильных CPC к инфекции CVB3.

Затем, чтобы определить, инфицировал ли CVB3 CPC in vivo , проводили иммуноокрашивание сердец детенышей мыши, инфицированных eGFP-CVB3 (10 7 БОЕ IP). Сердца собирали через 2 дня PI и заливали парафином для гистологического анализа. Экспрессия вирусного белка (eGFP), локализованная совместно с c-kit и Sca-1, что указывает на инфицирование CPC в ювенильном сердце ( Рисунок 1E, и Рисунок 1F , соответственно).Интересно, что экспрессия вирусного белка не наблюдалась в окружающем миокарде, что позволяет предположить, что CPC были преимущественно нацелены на инфекцию в сердце юноши.

Создание мышиной модели субклинической инфекции CVB3 для изучения изменений CPC в сердце

Для изучения сублетальной ювенильной инфекции мышей инфицировали 10 7 БОЕ GFP-CVB3 на 3-й постнатальный день ( Рисунок 2, ). Этот инокулят вируса хорошо переносился, и у инфицированных детенышей мышей не было явных нарушений здоровья.Сосание и прибавка в весе у инфицированных детенышей были такими же, как у контрольных мышей с ложной инфекцией. Несмотря на отсутствие явного заболевания, большое количество инфекционного вируса и вирусной геномной РНК было обнаружено в сердце до 9 дней ИП, что подтверждает кардиальный тропизм вируса ( Рисунок 2A ), как показано ранее на модели взрослых мышей. другими группами [30], [31], [32]. Кроме того, постепенное снижение соотношения положительной и отрицательной смысловой цепей вирусного генома наблюдалось с течением времени в сердце ( Рисунок 2B ), аналогично предыдущим исследованиям, описывающим инфекцию CVB3 в ЦНС новорожденных [33].Титры вирусов в сердце определяли с течением времени с помощью стандартного анализа бляшек на клетках HeLa и схожи с результатами, используя количественную ОТ-ПЦР в реальном времени для положительного смыслового вирусного генома ( Рисунок 2C, ). Никакой существенной разницы в соотношении массы сердца к массе тела (HW / BW) не наблюдалось между CVB3 и ложно-инфицированными животными в любой момент времени ( , рисунок 2D, ; двусторонний дисперсионный анализ ANOVA). Иммунофлуоресценция для CD3 и Iba-1 (Т-клеток и макрофагов, соответственно) не выявила значительной инфильтрации иммунных клеток после инфекции CVB3 в сердце молодых мышей, получивших сублетальную дозу вируса ( Рисунок 2E ).Через 2 дня ИП окрашивание гематоксилин-эозином (H&E) показало, что как инфицированные, так и ложно-инфицированные мыши показали нормальное расположение миофибрилл. Кроме того, окрашивание трихромом по Массону не выявило рубцевания миокарда во время острой фазы инфекции.

Рис. 2. Отсутствие заметной сердечной гипертрофии или иммунопатологии в сердце взрослого после ювенильной инфекции CVB3.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали и проверяли на титры вирусов с течением времени. (A) Копий вируса в сердце определяли с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени. Значение R 2 (0,997) определяли путем построения графика значений C T в зависимости от количества вирусных копий (верхний правый угол). Значение 1,00 R 2 указывает на то, что все точки данных точно лежат на линии графического набора данных. (B) Отношение вирусного генома с положительным и отрицательным смыслом было рассчитано с течением времени в сердце. (C) Титры вирусов в сердце определяли с помощью стандартного анализа бляшек на клетках HeLa. (D) Используя двусторонний статистический анализ ANOVA, не наблюдалось различий в соотношении массы сердца к массе тела между инфицированными (день 2, n = 10; день 6, n = 8; день 9, n = 5; день 28. , n = 12; 77-й день, n = 8) и ложно инфицированных мышей (2-й день, n = 19; 6-й день, n = 8; 9-й день, n = 5; 28-й день, n = 6; 77-й день, n. = 6) до 77 дней ИП. (E) Срезы сердца мышей, иммуноокрашенных на Т-клетки (CD3) и макрофаги (Iba1) на 2 и 77 день ИП, показали относительно низкие уровни воспалительных клеток в миокарде.Кроме того, срезы сердца проверяли на гистопатологию с помощью окрашивания гематоксилином и эозином (H&E) или трихромом по Массону. Окрашивание H&E подтвердило нормальное расположение миофибрилл, а окрашивание трихромом по Массону показало отсутствие фиброза после инфекции. Показаны репрезентативные изображения трех инфицированных или ложно инфицированных мышей. Также показаны положительные контроли селезенки для окрашивания как CD3, так и Iba1.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g002

Повышенная экспрессия Sca-1 в инфицированном ювенильном миокарде

Для дальнейшего изучения исходов инфицированных CPC иммуногистохимия была проведена на сердцах инфицированных детенышей мыши с использованием антител против Sca-1 и маркеров клеточной линии через 2 дня PI ( Рисунок 3, ).Считается, что клетки-предшественники c-kit + представляют наиболее примитивную недифференцированную популяцию, в то время как клетки-предшественники Sca-1 + демонстрируют профиль транскрипции, близкий к кардиомиоцитам [34], [35]. Мы наблюдали большое начальное увеличение количества клеток Sca-1 + в сердце по сравнению с ложно инфицированными контрольными мышами ( Рисунок 3A ). Мы определили, произошли ли эти клетки Sca-1 + из резидентных сердечных клеток-предшественников или же были взяты из периферической крови в ответ на вирусную инфекцию.Суспензии клеток, полученные из ферментативно диссоциированных инфицированных сердец, анализировали с помощью проточной цитометрии на коэкспрессию Sca-1 и маркера гемопоэтических клеток CD45. Результаты проточной цитометрии подтвердили ~ двукратное увеличение процента клеток Sca-1 + , выделенных из сердца в ранний момент времени после инфицирования, по сравнению с ложно инфицированными контрольными мышами (83,5% против 40,7%, соответственно). Распространение клеток Sca-1 + в сердце после инфекции включало как популяции клеток CD45 + , так и CD45 ( , фиг. 3B, ).Однако больший процент клеток Sca-1 + был в значительной степени отрицательным по CD45 (69,4% против 14,1% соответственно) или по маркеру гемопоэтических стволовых клеток CD34 (31,8% против 3,3%; данные не показаны), что указывает на возможное размножение резидентных клеток-предшественников в противоположность привлечению клеток-предшественников, происходящих из периферической крови. В сочетании с результатами нашей гистологии, показавшими отсутствие иммунной инфильтрации, эти результаты исключили значительный ответ кроветворных клеток в сердце, вызванный вирусом через 2 дня ИП.

Рисунок 3. Острая инфекция CVB3 у молодых мышей вызвала увеличение экспрессии Sca-1 в миокарде.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали, и сердца выделяли через 2 дня ИП. Залитые парафином срезы сердечной ткани депарафинизировали и окрашивали с использованием антител против Sca-1. Альтернативно сердца были механически диссоциированы, и клетки были зафиксированы в 10% формалине в PBS для анализа FACS. (A) Увеличение количества клеток Sca-1 + (зеленый цвет) наблюдалось в сердце после инфицирования. (B) FACS-анализ подтвердил увеличение количества клеток Sca-1 + в сердце после инфекции. Было показано, что в первую очередь резидентные Sca-1 + , но также происходящие из крови (CD45 + ) клетки Sca-1 + увеличивают количество в сердце после инфекции. Показаны репрезентативные результаты проточной цитометрии для трех инфицированных или ложно инфицированных мышей.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g003

Инфекция CVB3, индуцированная преждевременной дифференцировкой сердечных клеток-предшественников

Хотя точная роль экспансии клеток Sca-1 + в сердце после инфекции CVB3 остается неуловимой, экспрессия белка Sca-1, как ранее было показано, действует в подавлении прогрессирования клеточного цикла [36].Недавняя литература предполагает, что в некоторых типах клеток-предшественников экспрессия Sca-1 остается на очень низком уровне, чтобы предотвратить неконтролируемую пролиферацию клеток и преждевременное старение. Когда эти клетки входят в программу дифференцировки, активация Sca-1 приводит к полному выходу из клеточного цикла, что является необходимым приквелом к ​​дифференцировке [36], [37]. Если Sca-1 играет аналогичную роль в качестве маркера поздних клеток-предшественников в CPCs [34], активация Sca-1 может указывать на большое увеличение количества клеток-предшественников, которые быстро подвергаются дифференцировке в ответ на инфекцию CVB3.

Затем мы исследовали раннюю экспансию клеток Sca-1 + в сердце после заражения CVB3 путем определения уровней экспрессии маркеров клеточного происхождения, которые совместно локализовались с окрашиванием Sca-1. Инфицированные сердца наблюдали с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии на экспрессию Sca-1 и маркеры зрелого сердечного происхождения для гладкомышечных клеток сосудов, эндотелиальных клеток сосудов и кардиомиоцитов (SM22, фактор фон Виллебранда — vWF и саркомерный актин, соответственно). Клетки Sca-1 + показали совместную локализацию с SM22 и vWF ( Рисунок 4A, и Рисунок 4B, , соответственно).Однако, по-видимому, Sca-1 не локализуется совместно с саркомерным актином ( , фиг. 4C, ), что позволяет предположить возможную приверженность клеток Sca-1 + к линии сосудистых клеток в сердце после инфекции. Интересно, что инфицированные клетки c-kit + , выращенные в культуре, показали резкое увеличение экспрессии альфа-актина ( Рисунок 4D ; ** p <0,01). Также не наблюдалось увеличения экспрессии SM22 в изолированных клетках c-kit + после заражения, что указывает на то, что CVB3 может индуцировать преимущественную дифференцировку кардиомиоцитов в CPC, выращенных в культуре.Эти результаты контрастируют с повышенными уровнями экспрессии SM22 в инфицированных клетках Sca-1 + , обнаруженных в сердце мыши. Мы предполагаем, что окружающая среда in vivo может влиять на паттерны приверженности клеточного клона после инфицирования CVB3 в сердце.

Рисунок 4. CVB3 индуцировал преждевременную дифференцировку сердечных клеток-предшественников.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали, и сердца выделяли через 2 дня ИП.Залитые парафином срезы ткани сердца депарафинизировали и окрашивали с использованием антител против Sca-1, SM22, фактора фон Виллебранда (vWF) и саркомерного актина (s-актин). (A) Повышение экспрессии SM22 (красный) наблюдалось в инфицированных срезах сердца, а клетки Sca-1 + (зеленый) экспрессировали высокие уровни SM22 (светло-розовые стрелки). (B) vWF (красный) экспрессировался рядом с капиллярами Sca-1 + после инфицирования (светло-розовые стрелки). (C) Напротив, s-актин не смог совместно локализоваться с экспрессией Sca-1 в инфицированном сердце (голубые стрелки).Показаны репрезентативные изображения трех инфицированных или ложно инфицированных мышей. (D) c-kit Клетки + были выделены из сердца молодых мышей, размножены в культуре и инфицированы eGFP-CVB3 (moi = 1). Относительные уровни экспрессии альфа-актина и SM22 в ложно-инфицированных или инфицированных CVB3 ювенильных клетках c-kit + количественно оценивали с помощью вестерн-анализа. Статистически значимая разница наблюдалась с использованием T-критерия Стьюдента (** p <0,01).

https: // doi.org / 10.1371 / journal.ppat.1004249.g004

Поскольку известно, что многие вирусы, включая CVB3, изменяют клеточный цикл, срезы сердца были иммуноокрашены с использованием антител против c-kit, Sca-1 и маркера пролиферации Ki67. Снижение количества циклических клеток Ki67 + в сердцах наблюдалось у инфицированных животных через 2 дня PI по сравнению с имитационно инфицированными контролями ( , фиг. 5A, ), и эти результаты были количественно определены с помощью анализа ImageJ (, , фиг. 5Б ).Хотя мы наблюдали раннее увеличение количества клеток Sca-1 + в сердце сразу после инфицирования, что свидетельствует о начальном быстром росте клеток-предшественников, в клетках Sca-1 + преимущественно отсутствовала экспрессия Ki67 на 2 дня PI, что соответствовало его уровню. предполагаемая роль супрессора клеточного цикла ( Рисунок 5C ). Иммуноокрашивание как для Ki67, так и для c-kit выявило значительное снижение количества пролиферирующих клеток c-kit + в сердцах инфицированных детенышей ( Рисунок 5D ; ** p <0.01).

Рис. 5. Ювенильная инфекция CVB3 вызвала остановку роста CPC.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали, и сердца выделяли через 2 дня ИП. Залитые парафином срезы сердечной ткани депарафинизировали и окрашивали с использованием антител против Ki67, Sca-1 и c-kit. (A) Иммунофлуоресцентная микроскопия выявила резкое снижение количества клеток Ki67 + в миокарде новорожденного через 2 дня после ИП. (B) Уменьшение количества клеток Ki67 + в инфицированном сердце было количественно определено и показано как статистически значимое (* p <0.05; T-тест Стьюдента) с помощью программного обеспечения ImageJ. (C) Иммуноокрашивание на Sca-1 и Ki67 показало заметное увеличение количества клеток Sca-1 + в инфицированном сердце через 2 дня PI. Однако эти клетки были преимущественно отрицательными по Ki67, что указывает на отсутствие клеточной пролиферации. (D) Количественная оценка совместной локализации c-kit и Ki67 показала значительное снижение процента циклических клеток c-kit + в сердце через 2 дня PI (** p <0,01; T-критерий Стьюдента).Показаны репрезентативные изображения трех инфицированных или ложно инфицированных мышей.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g005

Ювенильная инфекция CVB3 истощает пулы CPC у взрослых мышей

CVB3, как было ранее показано, индуцирует зависимый от каспазы-3 апоптоз в сердце и ЦНС [10]. Чтобы определить, привела ли инфекция CVB3 к апоптозу и постоянному снижению CPC в ювенильном сердце, срезы инфицированных мышей иммуноокрашивали с использованием антител против c-kit и активной каспазы-3 ( Рисунок 6, ).В инфицированном сердце наблюдалось усиление окрашивания активной каспазы-3 (красный), и активная каспаза-3 совместно локализовалась с некоторыми клетками c-kit + (зеленые) ( , фиг. 6A, , ). Иногда инфицированные клетки c-kit + в сердце обнаруживали характерные апоптотические пузыри и пикнотические ядра ( Рисунок 6B, ). Количественная оценка окрашивания активной каспазой-3 указала на больший апоптоз в инфицированном сердце на 2-й день PI ( Рисунок 6C ; * p <0.05). Кроме того, большее количество клеток TUNEL + (ApopTag) на срез было обнаружено в инфицированных сердцах по сравнению с таковыми у ложно инфицированных контрольных мышей на 5-й день ИП ( , фиг. 6D, ). Эти результаты показывают, что значительное количество клеток в сердце инфицированного подростка, которое может включать CPC, подверглось вирус-индуцированному апоптозу.

Рисунок 6. Устойчивое снижение пула CPC в сердце взрослого человека после ювенильной инфекции CVB3.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали, сердца выделяли и анализировали с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии с течением времени. (A) Депарафинизированные срезы окрашивали с использованием антитела против активной каспазы-3 (красный) и c-kit (зеленый) через 2 дня PI. (B) Залитые парафином срезы сердечной ткани депарафинизировали и окрашивали с использованием антитела против c-kit (красный) и GFP (вирус, зеленый) через 2 дня PI. Клеточные пузыри и пикнотические ядра иногда наблюдались в инфицированных клетках c-kit + . (C) Количество активных клеток каспазы-3 + на срезах сердца было количественно определено как для инфицированных, так и для ложно-инфицированных мышей через 2 дня PI (* p <0.05; Т-тест Стьюдента). (D) Количество клеток TUNEL + (ApopTag) на срезах сердца определяли количественно для инфицированных и ложно-инфицированных мышей через 5 дней ИП. (E) Количество клеток c-kit + (зеленые) на срезах сердца проверяли на 77-й день ИП с помощью флуоресцентной микроскопии. (F) Количество клеток c-kit + (зеленые) на срезах сердца количественно определяли с течением времени с помощью анализа ImageJ как для инфицированных, так и для ложно-инфицированных мышей. Уменьшение количества клеток c-kit + наблюдалось в срезах сердца инфицированных животных на 77-й день PI (** p <0.001; Т-тест Стьюдента с поправкой Бонферонни). Парные сравнения проводились с использованием T-критериев Стьюдента для изучения групповых различий в количестве c-kit в каждый момент времени. Для контроля множественных сравнений была применена поправка Бонферонни, поэтому критический альфа-уровень был установлен на 0,01. Анализ показал, что количество c-kit на 77 день было значительно выше в группе имитации по сравнению с группой CVB, {t (4) = 11,87, p <0,001}. Различия между группами трендов также были обнаружены на 2-й день {t (4) = 2.67, p = 0,056}, день 5 {t (4) = 2,49, p = 0,068} и день 28 {t (5) = 2,49, p = 0,055}, с более высоким количеством c-kit в CVB группы на 2 и 5 дни, но большее количество в фиктивной группе на 28 день. Количество c-kit в каждой группе существенно не отличалось в день 9 {t (3) = 0,41, p = 0,71}. Значения были определены количественно на основе репрезентативных изображений, полученных от трех инфицированных или ложно инфицированных мышей.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g006

Затем мы определили, привело ли раннее воздействие CVB3 к необратимому снижению числа CPC в сердце.Молодых мышей инфицировали 10 7 БОЕ eGFP-CVB3, и количество клеток c-kit + оценивали в ткани сердца на 2, 5, 9, 28 и 77 дней ИП. Через 2 и 5 дней ИП мы наблюдали тенденцию к увеличению количества клеток c-kit + , хотя эти результаты не достигли статистической значимости. К 77 дню ИП статистически значимое снижение количества клеток c-kit + наблюдалось в инфицированном сердце ( Рисунок 6E и Рисунок 6F ; ** p <0.001). Sca-1, классический маркер сердечных клеток-предшественников, который означает прогрессирование в направлении дифференцировки, временно увеличивался, а затем оставался неопределяемым к 5-дневному ИП (данные не показаны). Наблюдаемое снижение количества CPC c-kit + сохранялось, несмотря на разрешение инфекции через 28 дней ИП, как показали анализ бляшек для инфекционного вируса или количественная ПЦР для вирусной РНК. Эти результаты в сочетании с нашими предыдущими выводами, показывающими, что CVB3 уменьшал пул самообновляющихся клеток-предшественников частично за счет запуска апоптоза или преждевременной дифференцировки, а истощение клеток-предшественников продолжалось во взрослом возрасте, несмотря на клиренс вируса и отсутствие продолжающегося воспаления.

Субклиническая инфекция CVB3 предрасполагает молодых мышей к вызванной бета-адренергическим стрессом сердечной недостаточности в более позднем возрасте

Предыдущие исследования кардиотоксичности, опосредованной антрациклином, показали, что воздействие доксорубицина (DOX) на молодых людей оказывает сильное влияние на CPC у мышей, вызывая их старение и значительно сокращая их количество с течением времени [25]. Хотя в базовых условиях при сравнении мышей, получавших DOX, с контрольными животными не наблюдалось физиологических различий или обнаруживаемого сердечного дефицита, у мышей, получавших DOX, после интенсивных физических упражнений индуцировалась выраженная кардиомиопатия, состоящая из значительного увеличения массы сердца, дилатации левого желудочка и рубцевания миокарда. плавание.Чувствительность к сердечной недостаточности, вызванной стрессом, объяснялась неспособностью животных, получавших DOX, подвергаться ремоделированию сосудов в ответ на повышенную потребность сердца в кислороде; процесс, который, как известно, в значительной степени управляется паракринной передачей сигналов от CPC.

Несмотря на снижение количества CPC после заражения CVB3, мыши, инфицированные несовершеннолетними, развивались нормально и были фенотипически неотличимы от контрольных мышей с ложной инфекцией на 77-й день ИП. Мы определили, вызывает ли стресс патологическое ремоделирование у взрослых мышей, инфицированных несовершеннолетними, которым вводили бета-адренергический агонист изопротеренол (ISO) [38].На 91 день ИП ювенильных инфицированных или ложно инфицированных мышей обрабатывали ISO в течение 10 дней, лечили только носителем или не получали лечения. Хотя ложно-инфицированные мыши показали увеличение отношения массы сердца к длине большеберцовой кости (HW / TL) после обработки ISO, у молодых инфицированных животных наблюдалось значительно большее увеличение массы сердца, чем у ложно инфицированных мышей ( Рисунок 7A ; * р <0,001). Поперечные срезы ткани сердца мышей, получавших лечение ISO, инфицированных в раннем возрасте, показали увеличенные левые желудочки с истончением мышечной стенки ( Рисунок 7B ).Кроме того, у мышей, обработанных ISO (CVB3-инфицированные и ложно-инфицированные), развился фиброз, как показано окрашиванием трихромом по Массону ( Рисунок 7C, ). Эти наблюдения подтверждают нашу гипотезу о том, что субклиническая инфекция CVB3 предрасполагает мышей к большему патологическому ремоделированию в сердце. Следует отметить, что инфильтрирующие Т-клетки не наблюдались в CVB3 или ложно инфицированном сердце после обработки ISO ( , фиг. 7D, ).

Рис. 7. Гипертрофия сердца, вызванная бета-адренергической стимуляцией, у взрослых мышей, инфицированных CVB3 в раннем возрасте, приводит к дилатационной кардиомиопатии.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали. Через 13 недель использовали 10-дневное лечение изопротеренолом (ISO) для индукции физиологической гипертрофии у инфицированных (без лечения, n = 6; только носитель, n = 4; ISO, n = 4) или ложно-инфицированных мышей (без лечения , n = 4; только автомобиль, n = 8; ISO, n = 5). В качестве альтернативы, плавательные упражнения использовались для индукции физиологической гипертрофии у выживших мышей. (A) Зараженные вирусом мыши показали значительное увеличение отношения массы сердца к длине большеберцовой кости после обработки ISO по сравнению с контрольными мышами, инфицированными имитацией (* p <0.001; двусторонний дисперсионный анализ). (B) . Сердца инфицированных мышей показали гипертрофию сердца по окрашиванию H&E после обработки ISO. (C) Более высокое увеличение срезов сердца, окрашенных трихромом Массона, выявило фиброз (синий) как у инфицированных, так и у ложно инфицированных мышей только после обработки ISO. (D) Небольшая инфильтрация Т-лимфоцитами или ее отсутствие наблюдались в сердце после обработки ISO как у инфицированных, так и у ложно инфицированных мышей. Показаны положительный контроль селезенки на окрашивание CD3 и контроль без первичных антител.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g007

CVB3-опосредованная потеря CPC нарушает ремоделирование сосудов при повышенной сердечной нагрузке

Клетки сосудов сердца очень динамичны и отвечают за адаптивную перестройку сосудистой сети. Ремоделирование сосудов осуществляется как за счет ангиогенеза (разветвление ранее существовавших кровеносных сосудов), так и за счет васкулогенеза (образование кровеносных сосудов de novo). Эти процессы критически важны для сердца, чтобы реагировать на различные раздражители, включая стрессоры.При возникновении физиологического стресса сократительная способность сердца увеличивается, что увеличивает потребность в кислороде. Ремоделирование сосудов необходимо для достаточной перфузии миокарда насыщенной кислородом крови. Доказано, что стволовые клетки непосредственно участвуют в ремоделировании сосудов посредством дифференцировки и высвобождения паракринных факторов, таких как фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) [25].

Чтобы проверить, повлияла ли на сосудистая сеть сердца потеря клеток-предшественников из-за предшествующей инфекции CVB3, мы окрашивали срезы сердца животных, обработанных ISO, на маркер кровеносных сосудов, CD31.У мышей, получавших только носитель, не наблюдали значительных различий в плотности кровеносных сосудов CD31 + между инфицированными и ложно инфицированными животными ( , фиг. 8A, ). Как и ожидалось, лечение ISO у ложно инфицированных мышей приводило к увеличению экспрессии CD31, что соответствовало усилению ремоделирования сосудов в ответ на увеличенную рабочую нагрузку, вызванную бета-адренергическим стрессом (* p <0,05). Напротив, не наблюдалось соответствующего увеличения экспрессии CD31 у ювенильных инфицированных мышей после воздействия ISO (** p <0.01). Эти данные показывают, что при повышенной нагрузке сердце модифицирует свою сосудистую сеть, чтобы удовлетворить потребности, но ювенильная инфекция CVB3 нарушает эту компенсаторную функцию.

Рисунок 8. Нарушение ремоделирования сосудов после гипертрофии сердца, вызванной бета-адренергической стимуляцией, у взрослых мышей, инфицированных CVB3 в раннем возрасте.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали. Через 13 недель использовали 10-дневное лечение ISO для индукции физиологической гипертрофии у инфицированных или ложно-инфицированных мышей. (A) Сосудистые изменения в сердце взрослого человека оценивали путем иммуноокрашивания на CD31 (маркер эндотелиальных клеток). Значительное усиление окрашивания CD31 наблюдалось у мышей с ложной инфекцией после обработки ISO (* p <0,05; двухфакторный дисперсионный анализ). Апостериорный сравнительный тест Newman Keuls для взаимодействия группа × лечение показал, что окрашивание CD31 было значительно выше в группе имитации ISO {6,36 (0,13)} по сравнению с группой фиктивного носителя {5,49 (0,18)}. Напротив, значительное снижение окрашивания CD31 наблюдалось у инфицированных мышей по сравнению с ложно-инфицированными мышами после обработки ISO (** p <0.01; двусторонний дисперсионный анализ). (B) Уменьшение экспрессии белка VEGF (вестерн-блоттинг) наблюдали у мышей, обработанных ISO, инфицированных CVB3 (* p <0,05; T-критерий Стьюдента). (C) , (D) Срезы сердца из контролей, содержащих только носитель, и иммуноокрашенные на CD31, не показали различий между ложно-инфицированными и инфицированными CVB3 мышами. (E) Окрашивание CD31 и васкуляризацию около участков фиброза (окрашивание трихромом по Массону) наблюдали после обработки ISO у ложно-инфицированных мышей.Области фиброза были обведены светло-фиолетовым цветом. Окрашивание CD31 (голубые стрелки), связанное с васкуляризацией (светло-желтые стрелки), наблюдалось при большем увеличении. (F) Напротив, меньшее окрашивание CD31 и ограниченная васкуляризация наблюдались после обработки ISO у мышей, инфицированных CVB3.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g008

Поскольку известно, что CPC выделяют несколько факторов, включая VEGF, которые стимулируют образование кровеносных сосудов, мы затем попытались определить, нарушена ли выработка VEGF в сердце. .Вестерн-блоты гомогенатов сердца, полученных от ложных и инфицированных молодых мышей на 91 день ИП, зондировали на уровни экспрессии VEGF. Мы обнаружили, что экспрессия VEGF была значительно ниже в сердцах обработанных ISO мышей, инфицированных CVB3, по сравнению с ложно инфицированными контрольными животными ( Рисунок 8B ; * p <0,05). Визуальный осмотр срезов сердца у мышей, получавших только носитель, показал сходные уровни окрашивания CD31 между ложно инфицированными и инфицированными CVB3 мышами, получавшими только носитель (фигура , фигура 8C, и , фигура 8D, , соответственно).Напротив, высокие уровни окрашивания CD31 ассоциированной сосудистой сети наблюдались у обработанных ISO ложно-инфицированных мышей, особенно в областях сердца, демонстрирующих признаки фиброза, обведенные пурпурным цветом ( Рисунок 8E ). У мышей, инфицированных CVB3, после обработки ISO более низкие уровни окрашивания CD31 и меньшая сосудистая сеть наблюдались в областях сердца, показывающих признаки фиброза, по сравнению с обработанными ISO мышами с ложной инфекцией ( Рисунок 8F ).

Степень фиброза в срезах сердца измеряли с использованием микроскопа Keyence (BZ-9000) с захватом в светлом поле на имитируемых или инфицированных CVB3 мышах после обработки ISO ( , рисунок 9, ).CVB3-инфицированные мыши показали увеличенные желудочки, связанные с большим количеством фиброза (синий сигнал), используя функцию слияния Keyence. Фиброз был более обширным в сердцах мышей, инфицированных вирусом CVB3, после обработки ISO по сравнению с мышами с ложной инфекцией, как было количественно определено с помощью программного обеспечения Keyence BZ-9000 Generation II Analyzer ( Рисунок 9B , Рисунок 9C и Рисунок 9D ; * p <0,001). Эти результаты предоставляют дополнительные доказательства того, что самоограниченная ювенильная инфекция CVB3 может иметь длительные эффекты на способность взрослых мышей подвергаться компенсаторному ремоделированию сосудов при сердечном стрессе.

Рисунок 9. Повышенный фиброз после вызванной бета-адренергической стимуляцией гипертрофии сердца у взрослых мышей, инфицированных CVB3 в раннем возрасте.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали. Через 13 недель использовали 10-дневное лечение ISO для индукции физиологической гипертрофии у инфицированных или ложно-инфицированных мышей. (A) Целые срезы сердца визуализировали с помощью микроскопа Keyence (BZ-9000) с использованием захвата в светлом поле для определения степени фиброза (окрашивание в синий цвет).Несколько полей были захвачены с использованием 4-кратного объектива и сшиты вместе с помощью функции Keyence Merge. (B) Процент фиброза на площадь определяли количественно с использованием функции однократной экстракции BZ-9000 Generation II Analyzer (Keyence) программного обеспечения для подсчета гибридных клеток на основе оттенка. После обработки ISO наблюдалось значительное увеличение фиброза у инфицированных мышей (* p <0,001; двухфакторный дисперсионный анализ). (C) , (D) Более высокое увеличение срезов сердца показало более высокие уровни фиброза в сердце CVB3-инфицированных мышей.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g009

Субклиническая инфекция CVB3 предрасполагает молодых мышей к сердечной недостаточности, вызванной физиологическим стрессом, в более позднем возрасте

Интенсивное плавание можно считать естественным «физиологическим» стрессом. Чтобы определить, может ли естественный стресс вызвать большую сердечную недостаточность после инфекции, взрослых мышей, инфицированных CVB3 в раннем возрасте, подвергали нагрузке с физической нагрузкой, которая заключалась в ежедневном непрерывном плавании в течение 90 минут в течение 14 дней подряд.Следует отметить, что мыши, ранее инфицированные CVB3, не плавали так же энергично, как контрольные мыши с ложной инфекцией (данные не показаны). Следуя протоколу плавания, мы наблюдали значительное увеличение отношения массы сердца к длине большеберцовой кости (HW / TL) у инфицированных мышей по сравнению с ложно инфицированными контрольными мышами ( Рисунок 10A, ; * p <0,05). Поперечные срезы этих сердец выявили увеличенные левые желудочки с истончением мышечной стенки ( Рисунок 10B ). Кроме того, окрашивание H&E показало наличие миофибриллярного беспорядка, а окрашивание трихромом Массона выявило фиброз у инфицированных мышей после контрольного заражения ( , фиг. 10C, ), хотя никаких доказательств инфильтрации Т-клеток не наблюдалось ( , фиг. 10D, ).Взятые вместе, эти данные предполагают, что легкая ювенильная инфекция CVB3 может привести к патологическому ремоделированию у взрослых мышей после нагрузки при отсутствии значительного воспаления.

Рисунок 10. Гипертрофия сердца, вызванная физической нагрузкой, у взрослых мышей, инфицированных CVB3 в раннем возрасте, приводит к дилатационной кардиомиопатии.

Трехдневных мышей инфицировали eGFP-CVB3 (10 5 БОЕ IP) или ложно инфицировали. Через 13 недель упражнения по плаванию использовали для индукции физиологической гипертрофии у выживших мышей. (A) Зараженные вирусом мыши (n = 5) показали значительное увеличение (* p <0,05; T-критерий Стьюдента) отношения веса сердца к длине большеберцовой кости после 21-дневной процедуры плавания по сравнению с ложно инфицированными контрольными мышами ( п = 4). (B) Сердца инфицированных мышей показали гипертрофию сердца при окрашивании H&E. (C) Более высокое увеличение срезов сердца, окрашенных H&E и трихромом Массона, выявило признаки воспаления и фиброза (соответственно) у инфицированных мышей после процедуры плавания. (D) Небольшая инфильтрация Т-клеток наблюдалась в сердце после процедуры плавания как у инфицированных, так и у ложно инфицированных мышей. Показаны типичные изображения слайд-сканера или микроскопические изображения трех инфицированных или ложно инфицированных мышей.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g010

Обсуждение

Вирусы Коксаки (CV) — это энтеровирусы, которые чаще всего вызывают легкую самоограничивающуюся инфекцию, характеризующуюся лихорадкой, симптомами со стороны верхних дыхательных путей и сыпью.В редких случаях инфекция, вызванная вирусом Коксаки B (CVB), может вызывать тяжелые воспалительные заболевания, такие как панкреатит, менингоэнцефалит и миокардит. Исследования пациентов с терминальной идиопатической дилатационной кардиомиопатией выявили обнаруживаемую РНК CVB в сердце в 70–80% случаев, несмотря на отсутствие в анамнезе вирусного миокардита [8], [9]. Это наблюдение вызвало обеспокоенность по поводу того, что легкая инфекция CVB может способствовать долгосрочным сердечным осложнениям. Возможные механизмы не были проверены, хотя некоторые исследования предполагают аутоиммунные механизмы, которые включают экспрессию суперантигена, молекулярную мимикрию или случайное повреждение [39].Дилатационная кардиомиопатия является последним распространенным путем многих патологических процессов, при которых увеличенная полость желудочка и истонченная стенка желудочка приводят к плохой сократимости, низкой фракции выброса и во многих случаях диастолической дисфункции из-за фиброза. Этим признакам заболевания может предшествовать многолетняя компенсированная гипертрофия сердца, характеризующаяся утолщением и увеличением желудочков до того, как разовьется декомпенсация. В то время как миокардит, связанный с сердечно-сосудистыми заболеваниями, явно связан с сердечной недостаточностью, представление о том, что легкая инфекция сердечно-сосудистых заболеваний в детстве может предрасполагать к сердечной недостаточности у взрослых, ранее не исследовалось.Основываясь на нашем предыдущем наблюдении, что неонатальное воздействие кардиотоксического антрациклина доксорубицина (DOX) привело к сердечной недостаточности с поздним началом из-за истощения сердечных клеток-предшественников (CPC), мы предположили, что ювенильная инфекция CVB может иметь аналогичные последствия, если клетки-предшественники в сердце были восприимчивы к инфекции, аналогично предыдущим находкам в центральной нервной системе и костном мозге [15], [17].

В этой работе мы создали модель легкой инфекции ювенильного вируса Коксаки B3 (CVB3), которая не вызвала миокардита или инфильтрации иммунных клеток в сердце, но которая вызвала апоптоз или преждевременную дифференцировку CPC, что привело к значительному и устойчивому снижению количество CPC в сердце взрослого человека.Инфекционный вирус и вирусная РНК в конечном итоге были выведены из сердца. Мы еще не выяснили иммунные механизмы, ответственные за выведение вируса из сердца на нашей модели молодых мышей. Однако ограниченное окрашивание CD3 в сердце, наблюдаемое через 2 и 77 дней, согласуется с предыдущими исследованиями, демонстрирующими отсутствие функциональных противовирусных Т-клеток после инфекции CVB3 [40], [41], и предполагает, что реакция интерферона I типа в конечном итоге может быть отвечает за контроль вирусной инфекции [42].Мы наблюдали, что после воздействия CVB3 in vivo , CPC показали сильную тенденцию к дифференцировке в сосудистые клетки. Кроме того, ранее было показано, что CVB3 активирует аутофагию, клеточный процесс, который может быть важным во время клеточной дифференцировки [43]. Подобно DOX-индуцированному старению, преждевременная дифференцировка, опосредованная CVB3, снижает количество CPC, доступных в более позднем возрасте. Роль CPC в постнатальном развитии и физиологическом ремоделировании плохо изучена, но наблюдения, сделанные на ювенильной модели DOX, предполагают, что CPC важны для развития сосудов в растущем сердце, а также в ответ на физиологическую гипертрофию во время физических упражнений и в постинфарктном ремоделировании [25]. ].Результаты, представленные в этом исследовании, подтверждают гипотезу о том, что легкая инфекция CVB3 на ранней стадии развития может нарушить способность сердца подвергаться физиологическому ремоделированию, что приводит к дилатационной кардиомиопатии в более позднем возрасте.

Эпидемиологические исследования выявили связь между инфекциями CVB3 и сердечной недостаточностью; однако механистической связи не обнаружено. Чтобы изучить долгосрочные последствия инфекции CVB3 для хозяина, мы заразили трехдневных детенышей сублетальной дозой eGFP-CVB и исследовали сердца с течением времени.Мы наблюдали значительное снижение количества CPC в сердцах мышей, инфицированных в раннем возрасте. Кроме того, после того, как мышей подвергали сердечному стрессу посредством физических упражнений или фармакологической индукции, у взрослых мышей, перенесших ювенильную инфекцию CVB3, развивалась выраженная гипертрофия левого желудочка и расширение камеры. Насколько нам известно, наше исследование является первой моделью, показывающей, что легкая неонатальная инфекция CVB3 может предрасполагать к патологическому ремоделированию у взрослых мышей. Мы также наблюдали преждевременную дифференциацию CPC во время острой инфекции и устойчивое снижение количества CPC в более позднем возрасте, несмотря на отсутствие обнаруживаемого инфекционного вируса или вирусной РНК в сердцах взрослых животных.Кроме того, в базовых условиях не наблюдались физиологические отклонения или повреждения сердца. Патологическая гипертрофия, подтвержденная увеличением левого желудочка, дилатацией камеры и гистологическими особенностями миофибриллярного расстройства и фиброза, выявлялась только после того, как взрослые мыши подвергались повышенной сердечной нагрузке.

Наша модель сердечной недостаточности у взрослых мышей, инфицированных молодью, представлена ​​на рис. , рис. 11, . Склонность к патологическим изменениям сердца у мышей, инфицированных CVB3, может быть связана с нарушением ремоделирования сосудов в ответ на повышенную сердечную потребность, процесс, который требует участия CPC.Следует отметить, что недавно было показано, что эндогенные клетки c-kit + вносят существенный вклад в генерацию эндотелиальных клеток сердца во взрослом сердце [44]. Мы не наблюдали различий в плотности сердечных сосудов между ложными и инфицированными CVB взрослыми мышами до лечения ISO. Наши результаты указывают на нарушение компенсаторного ремоделирования, а не на ранее существовавшие недостатки в архитектуре сосудов. Подобный феномен наблюдался после опосредованного DOX истощения CPC [25]. Воздействие низких доз DOX на молодых мышей приводило к истощению CPC из-за раннего старения.Однако у взрослых мышей наблюдались нормальные физиологические и гистологические показатели сердца. Стрессовые факторы, такие как плавание, вызвали патологическое ремоделирование, а экспериментальный инфаркт миокарда привел к более тяжелым травмам и снижению выживаемости. Плохие результаты у мышей, получавших DOX, аналогичным образом связывали с нарушением способности к ремоделированию сосудов из-за истощения CPC. Было показано, что стволовые клетки играют решающую роль во время ремоделирования сосудов, стимулируя ангиогенез за счет высвобождения паракринных факторов и дифференцируясь с образованием новых кровеносных сосудов.Ранее мы показали, что инфекция CVB3 нейральных клеток-предшественников может иметь длительные эффекты на предопределение и развитие клеточного клона [45], [15]. Мы ожидаем, что клетки-предшественники в сердце, пережившие раннюю инфекцию CVB3, также могут изменять функцию CPC и обязательство клеточного клона. В наших исследованиях долгосрочных последствий ювенильной инфекции CVB3, истощение или изменение выживших CPC, которые обычно участвуют в васкулогенезе, а также снижение экспрессии стимулирующего паракринного фактора VEGF в сердце, вероятно, повлияли на адаптивную перестройку сосудов в ответ на сердечную стресс.

Рисунок 11. Модель сердечной недостаточности у взрослых мышей, инфицированных вирусом CVB3.

При усилении сердечной нагрузки увеличивается потребность миокарда в кислороде. CPC активируются, чтобы стимулировать ангиогенез через паракринную передачу сигналов или способствовать васкулогенезу посредством прямой дифференцировки в сосудистые клетки. После ювенильной инфекции CVB3 CPC истощаются, но сосудистая сеть сердца развивается нормально. Однако во время повышенной сердечной нагрузки меньше CPC доступно для участия в компенсаторном ремоделировании сосудов, что приводит к ишемическому миокарду.Это приводит к дезадаптивному ремоделированию желудочков.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004249.g011

Эти тонкие сердечные изменения могут оставаться незамеченными при нормальных обстоятельствах, но могут проявляться в условиях повышенной сердечной потребности, вызванной ли физическими упражнениями высокого уровня, хроническими. гипертония или ишемическое событие. Учитывая высокую распространенность сердечно-сосудистых заболеваний в популяции, многие люди, ведущие малоподвижный образ жизни, могут протекать бессимптомно. Есть много неотвеченных вопросов, которые может помочь решить наша животная модель ювенильной инфекции CVB3.Например, влияет ли инфекция CVB3 на стволовые клетки в любом возрасте или существует окно высокого риска в раннем детстве? Как ни странно, мы наблюдали, что CVB3 эффективно инфицировал CPC, полученные от молодых мышей (17 дней после рождения), но только плохо инфицированные CPC, полученные от взрослых животных. Определение допустимости CPC может пролить свет на механизм патогенеза и указать на возможные стратегии лечения. И разрешающие ювенильные CPC, и непермиссивные взрослые CPC экспрессировали высокие уровни рецептора Коксаки и аденовируса (CAR).Кроме того, другие типы клеток сердца экспрессируют высокие уровни CAR, включая кардиомиоциты, без значительных признаков инфекции. Напротив, некоторые клетки (В-лимфоциты), лишенные экспрессии CAR, восприимчивы к инфекции [13]. Настоящее исследование конкретно не определяет основу для дифференциальной проницаемости инфекции сердечных клеток-предшественников (CPC). Предпочтительная ювенильная инфекция CPC может в меньшей степени зависеть от экспрессии CAR и более вероятно определяться дополнительными факторами, такими как уровни экспрессии генов ответа на интерферон I типа, поток аутофагии в клетках-предшественниках, клеточная дифференцировка и статус активации / пролиферации этих клеток.

Какова судьба отдельных CPC после инфицирования сердца CVB3? Судьбу отдельных CPC, инфицированных CVB3, было бы трудно определить без стратегии отслеживания временных клеток. Однако взятые как популяция, наши данные предполагают, что CPC различаются по своей восприимчивости к инфекции, как с точки зрения репликации вируса, так и с точки зрения гибели / выживаемости клеток. Ранее мы показали, что клетки-предшественники нейронов, выращенные в культуре, различаются по своей восприимчивости к инфекции в зависимости от их статуса дифференцировки.CPC, выращенные в культуре, могут следовать аналогичной схеме пермиссивности, хотя дополнительные факторы могут также определять пермиссивность CPC в сердечной ткани, включая иммунный ответ хозяина.

В этих исследованиях использовался штамм CVB3 (штамм Вудраффа), полученный от пациента с миокардитом. Возможно, только некоторые штаммы CVB3 представляют риск истощения CPC и поздних сердечных осложнений. Из-за возможного интервала в несколько десятков лет между воздействием сердечно-сосудистой инфекции в детстве и развитием кардиальной симптоматики остаются проблемы с доказательством причинно-следственной связи у пациентов и определением возрастного порога уязвимости.Однако эти исследования вызывают опасения, что легкая инфекция CVB3 в детстве может иметь серьезные последствия. Профилактика этих поздних эффектов будет зависеть от внедрения безопасной и эффективной вакцины и / или разработки быстрой диагностики и применения противовирусной терапии у детей, подвергшихся воздействию в уязвимом возрасте.

Материалы и методы

Заявление о соблюдении этических норм

Это исследование было проведено в строгом соответствии с требованиями, относящимися к защите животных в рамках Политики службы общественного здравоохранения и Правил защиты животных Министерства сельского хозяйства США.Все экспериментальные процедуры с мышами были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных государственного университета Сан-Диего (форма протокола животных № 10-05-013F), и все усилия были предприняты, чтобы свести к минимуму страдания.

Создание рекомбинантного CVB3, экспрессирующего усиленный зеленый флуоресцентный белок (eGFP – CVB3)

Генерация eGFP – CVB3 была описана ранее [46]. Вкратце, была получена ДНК-плазмида, содержащая инфекционный клон CVB3 [47] (pH 3 — любезно предоставленный доктором.Кирк Ноултон, Калифорнийский университет в Сан-Диего). Эта плазмида ДНК была сконструирована так, чтобы она содержала сайт рестрикции Sfi1 (pMKS1). Ген eGFP амплифицировали из плазмиды экспрессии eGFP (Clontech, Пало-Альто, Калифорния) с использованием праймеров eGFP с фланкирующими сайтами Sfi1. Эти продукты ПЦР впоследствии были клонированы в pMKS1. Эту конструкцию трансфицировали в клетки HeLa RW [47] (любезно предоставлены доктором Райнером Вессели из Калифорнийского университета в Сан-Диего), и лизаты, содержащие инфекционный вирус, собирали в качестве исходных вирусов.Концентрации вирусов измеряли с помощью анализа бляшек. Исходные вирусные растворы готовили на клетках HeLa и разводили в DMEM (Invitrogen, Gaithersburg, MD) перед инокуляцией.

Мыши и вирусные прививки

Ежедневно наблюдали за

размножающимися парами мышей BALB / c, чтобы убедиться, что детеныши были идентифицированы в течение 24 часов после рождения. Трехдневных детенышей инфицировали внутрибрюшинно (IP) 1 × 10 7 БОЕ eGFP – CVB3. Через 2-10 дней ИП животных умерщвляли гипотермией / удушением CO 2 с последующим немедленным обезглавливанием.Взрослых мышей (4–11 недель ИП) анестезировали изофлураном и смещали шейные позвонки. Сердечки удаляли и промывали холодным PBS. Для гистологии сердца фиксировали погружением в 10% формалин с нейтральным буфером на 24 часа, а затем переносили в 70% этанол на дополнительные 24 часа. Затем ткань залили парафином.

Выделение и инфекция сердечных клеток-предшественников (CPC)

CPC выделяли с использованием набора для изоляции сердечных стволовых клеток Millipore (Millipore, каталожный номер SCR061) в соответствии с протоколом производителя.Для определения репликации CVB3 в культивируемых CPC клетки высевали в 6-луночные планшеты в концентрации 10 4 клеток / лунку. Через 3 дня клетки инфицировали eGFP-CVB3 при MOI = 1,0 или 1000. Вирусные титры измеряли в супернатантах культур, полученных каждый день после заражения. Для вестерн-блоттинга CPC высевали в 6-луночные планшеты в концентрации 10 6 клеток / лунку. Через 3 дня клетки инфицировали GFP-CVB3 при MOI = 100. Через три дня PI клетки лизировали в буфере RIPA и лизаты белков использовали для вестерн-блоттинга.

Гистологический анализ

Сердца, залитые парафином, разрезали на срезы толщиной 4 мкм. Затем срезы депарафинизировали ксилолом и регидратировали при ступенчатом уменьшении концентрации этанола с последующим добавлением PBS и дистиллированной воды. Извлечение антигена проводили кипячением срезов в натрийцитратном буфере (10 мМ цитрат натрия + 0,05% Tween20, pH 6,0). Для иммуноокрашивания использовали следующие первичные антитела: анти-CD3 (1 × 100, Biocare Med # CP215A), анти-Iba1 (1 × 500, Wako # JNh5100), кроличьи анти-GFP (1 × 100, Invitrogen # A6455). , козий анти-c-Kit (1-40, R&D # AF1356), крысиный анти-Sca-1 (1-25, Cedarlane cat # CL8934AP), мышиный анти-Ki67 (1-200, вектор # VP-K452), кроличьи антитела против SM22 (1-2000, Abcam # ab14106), кроличьи антитела против фактора фон Виллбранда (1-100, Sigma # F3520), кроличьи анти-CD31 (1-100, Abcam # ab28364), мышиный антисаркомерный актин ( 1∶100, Sigma # A2172).Запатентованный блокирующий раствор Perkin Elmer (Perkin Elmer # NEL702001) использовали для разведения антител и блокирования ткани. Апоптоз детектировали с использованием набора для обнаружения апоптоза ApopTag Red In situ (Chemicon / Millipore, Billerica, MA), как описано производителем.

Количественное определение фиброза

Поперечные срезы залитых в парафин сердец окрашивали трихромом Массона. Срезы всего сердца получали с помощью микроскопа Keyence (BZ-9000) с использованием захвата в светлом поле.Несколько полей были захвачены с использованием 4-кратного объектива и сшиты вместе с помощью функции Keyence Merge. Фиброз (окрашивание коллагена) измеряли с использованием функции Single Extraction программного обеспечения Hybrid Cell Count на основе оттенка.

Диссоциация всего сердца для анализа FACS

Извлеченных сердец помещали в буфер для изоляции, и избыток крови отжимали щипцами. Затем сердца измельчали ​​на кусочки размером ~ 2 мм в буфере для изоляции Millipore. Кусочки сердца ресуспендировали в буфере для диссоциации сердечной ткани Millipore и инкубировали при 37 ° C, встряхивая, при 200 об / мин.После 45 минут инкубации ткань механически диссоциировала в течение 5 минут повторным растиранием кончиком пипетки с широким отверстием. Затем ткани инкубировали еще 15 минут и затем механически диссоциировали в течение 5 минут. Большие кусочки ткани удаляли фильтрованием суспензии через установку Millipore 100 мкм Steriflip. Клетки фиксировали в 10% формалине в PBS. Для анализа FACS использовали следующие антитела: PE-anti-Sca-1 (1 × 100, BD # 552108), FITC-anti-Sca-1 (1 × 100, BD # 557405), APC-anti-CD45 (1 ∶100, Caltag # MCD4505).

Упражнение

От десяти до одиннадцати недель PI, неонатально инфицированных мышей подвергали физической нагрузке, которая заключалась в ежедневном плавании в резервуарах с подогретой водой с легким потоком, управляемым насосом, для поощрения активного плавания. После каждого сеанса плавания животным давали возможность прийти в себя под нагревательной лампой. Семидневный тренировочный период состоял из 5-минутного плавания в 1-й день, затем увеличивался ежедневно (15, 30, 45, 60, 75 и, наконец, 90 минут). После этой начальной недели обучения мышей выполняли ежедневные 90-минутные упражнения по плаванию в течение 14 дней.По завершении 14 дней полного плавания (всего 21 день) сердца вырезали для определения веса сердца (нормализованного по длине большеберцовой кости) и гистологии.

Бета-адренергическая стимуляция

Изопротеренола гидрохлорид ресуспендировали в кунжутном масле для продления поглощения. Тринадцать недель ИП, ювенильным инфицированным мышам вводили внутрибрюшинно (IP) 40 мг / кг / сут изопротеренола гидрохлорида ежедневно в течение 10 дней. После последнего дня инъекций сердца вырезали для определения веса сердца (нормализованного по длине большеберцовой кости) и гистологии.

Статистический анализ

Статистический анализ выполняли с помощью Т-критерия Стьюдента с использованием программного обеспечения Excel и двухфакторного дисперсионного анализа с использованием GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Значимость определялась по значению p 0,05 или ниже. В качестве альтернативы, статистический анализ проводился путем попарного сравнения с использованием T-критерия Стьюдента с поправкой Бонферонни, применяемой к контрольным образцам множественных сравнений. Значимость T-критерия Стьюдента с поправкой Бонферонни определялась значением p, равным 0.01 или ниже.

Благодарности

Проточный цитометрический анализ был проведен в центре проточной цитометрии SDSU.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: JS JMP RAG RF. Проведены эксперименты: JS JMP. Анализировал данные: JS JMP RAG RF. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты для анализа: CH MHK PEG MAS. Написал статью: JS RAG RF.

Ссылки

  1. 1. Карти С.М., Ян Д., Андерсон Д.Р., Уилсон Дж.Э., Макманус Б.М. (1997) Миокардит как системное заболевание: новые взгляды на патогенез.Clin Exp Pharmacol Physiol 24: 997–1003.
  2. 2. Sole MJ, Liu P (1993) Вирусный миокардит: парадигма для понимания патогенеза и лечения дилатационной кардиомиопатии. J Am Coll Cardiol 22: 99A – 105A.
  3. 3. Tam PE (2006) Миокардит, вызванный вирусом Коксаки: взаимодействие вируса и хозяина в патогенезе сердечных заболеваний. Вирусный иммунол 19: 133–146.
  4. 4. Grist NR, Bell EJ (1969) Вирусы Коксаки и сердце. Am Heart J 77: 295–300.
  5. 5. Whitton JL, Cornell CT, Feuer R (2005) Хозяин и вирусные детерминанты патогенеза и тропизма пикорнавирусов. Nat Rev Microbiol 3: 765–776.
  6. 6. Ward C (1978) Тяжелые аритмии при миоперикардите, вызванном вирусом Коксаки В3. Arch Dis Child 53: 174–176.
  7. 7. Fujioka S, Kitaura Y, Deguchi H, Shimizu A, Isomura T. и др. (2004) Доказательства вирусной инфекции в миокарде американских и японских пациентов с идиопатической дилатационной кардиомиопатией.Am J Cardiol 94: 602–605.
  8. 8. Петижан Дж., Копецка Х., Фреймут Ф., Ланглард Дж. М., Скану П. и др. (1992) Выявление энтеровирусов при эндомиокардиальной биопсии молекулярным методом. J Med Virol 37: 76–82.
  9. 9. Chiang FT, Lin LI, Tseng YZ, Tseng CD, Hsu KL и др. (1992) Обнаружение РНК энтеровируса у пациентов с идиопатической дилатационной кардиомиопатией с помощью полимеразной цепной реакции. J Formos Med Assoc 91: 569–574.
  10. 10. Feuer R, Mena I., Pagarigan RR, Harkins S, Hassett DE, et al.(2003) Coxsackievirus B3 и неонатальная ЦНС: роль стволовых клеток, развивающихся нейронов и апоптоза в инфекции, распространении вируса и болезни. Am J Pathol 163: 1379–1393.
  11. 11. Фойер Р., Пагариган Р. Р., Харкинс С., Лю Ф., Ханзикер И. П. и др. (2005) Вирус Коксаки нацелен на пролиферирующие клетки-предшественники нейронов в ЦНС новорожденных. J Neurosci 25: 2434–2444.
  12. 12. Табор-Годвин JM, Tsueng G, Sayen MR, Gottlieb RA, Feuer R (2012) Роль аутофагии во время инфицирования вирусом Коксаки нейральных предшественников и стволовых клеток.Аутофагия 8: 938–953.
  13. 13. Feuer R, Whitton JL (2008) Предпочтительная репликация вируса Коксаки в пролиферирующих / активированных клетках: последствия для тропизма, устойчивости и патогенеза вируса. Curr Top Microbiol Immunol 323: 149–173.
  14. 14. Rhoades RE, Tabor-Godwin JM, Tsueng G, Feuer R (2011) Энтеровирусные инфекции центральной нервной системы. Вирусология 411: 288–305.
  15. 15. Ruller CM, Tabor-Godwin JM, Van Deren DAJ, Robinson SM, Maciejewski S и др.(2012) Истощение нервных стволовых клеток и дефекты развития ЦНС после энтеровирусной инфекции. Am J Pathol 180: 1107–1120.
  16. 16. Tsueng G, Tabor-Godwin JM, Gopal A, Ruller CM, Deline S, et al. (2011) Вирус Коксаки преимущественно реплицируется и индуцирует цитопатические эффекты в недифференцированных нейральных клетках-предшественниках. J Virol 85: 5718–5732.
  17. 17. Althof N, Whitton JL (2012) Вирус Коксаки B3 инфицирует костный мозг и снижает восстановительную способность эритроидных и лимфоидных предшественников.J Virol 87: 2823–2834.
  18. 18. Робинсон С.М., Цуэнг Дж., Син Дж., Мангале В., Рахави С. и др. (2014) Вирус Коксаки B выходит из клетки-хозяина в сброшенных микровезикулах, отображающих аутофагосомные маркеры. PLoS Pathog 10: e1004045.
  19. 19. Джексон В.Т., Гиддингс Т.Х. мл., Тейлор М.П., ​​Мулиньяве С., Рабинович М. и др. (2005) Подрыв клеточного аутофагосомного аппарата вирусами РНК. PLoS Biol 3 (5): e156.
  20. 20. Anversa P, Kajstura J, Rota M, Leri A (2013) Восстановление нового сердца стволовыми клетками.Дж. Клин Инвест 123: 62–70.
  21. 21. Лю Дж, Ван И, Ду В, Ю Б. (2013) Миграция Sca-1-положительных сердечных стволовых клеток в модели сердечного инфаркта. Воспаление 36: 738–749.
  22. 22. Oh H, Bradfute SB, Gallardo TD, Nakamura T, Gaussin V и др. (2003) Сердечные клетки-предшественники из взрослого миокарда: возвращение, дифференциация и слияние после инфаркта. Proc Natl Acad Sci U S A 100: 12313–12318.
  23. 23. Бельтрами А.П., Барлуччи Л., Торелла Д., Бейкер М., Лимана Ф. и др.(2003) Взрослые кардиальные стволовые клетки мультипотентны и поддерживают регенерацию миокарда. Cell% 19 114: 763–776.
  24. 24. Фишер К.М., Коттедж К.Т., Ву В., Дин С., Гуде Н.А. и др. (2009) Усиление регенерации миокарда посредством генной инженерии сердечных клеток-предшественников, экспрессирующих киназу Pim-1. Тираж 120: 2077–2087.
  25. 25. Хуанг С., Чжан Х, Рамиль Дж. М., Рикка С., Ким Л. и др. (2010) Воздействие антрациклинов на несовершеннолетних нарушает функцию сердечных клеток-предшественников и васкуляризацию, что приводит к большей подверженности стресс-индуцированному повреждению миокарда у взрослых мышей.Тираж 121: 675–683.
  26. 26. Пуччини Дж. М., Руллер С. М., Робинсон С. М., Кнопп К. А., Бухмайер М. Дж. И др. (2013) Отчетливый тропизм нервных стволовых клеток, ранняя иммунная активация и патология сосудистого сплетения после инфицирования вирусом Коксаки в центральной нервной системе новорожденных. Lab Invest (In Press) ..
  27. 27. Zhang Y, Simpson AA, Ledford RM, Bator CM, Chakravarty S, et al. (2004) Структурные и вирусологические исследования стадий репликации вируса, на которые влияют антириновирусные соединения.J Virol 78: 11061–11069.
  28. 28. Anversa P, Fitzpatrick D, Argani S, Capasso JM (1991) Митотическое деление миоцитов в сердце стареющих млекопитающих крыс. Circ Res 69: 1159–1164.
  29. 29. Pearce BD, Steffensen SC, Paoletti AD, Henriksen SJ, Buchmeier MJ (1996) Стойкая гипервозбудимость зубчатых гранулярных клеток после инфицирования новорожденных вирусом лимфоцитарного хориоменингита. J Neurosci 16: 220–228.
  30. 30. Wessely R, Klingel K, Knowlton KU, Kandolf R (2001) Кардиоселективная инфекция вирусом Коксаки B3 требует интактной передачи сигналов интерферона I типа: последствия для смертности и ранней репликации вируса.Тираж 103: 756–761.
  31. 31. Kim KS, Hufnagel G, Chapman NM, Tracy S (2001) Вирусы Коксаки группы B и миокардит. Rev Med Virol 11: 355–368.
  32. 32. Feuer R, Mena I, Pagarigan RR, Hassett DE, Whitton JL (2004) Репликация вируса Коксаки и клеточный цикл: потенциальный регуляторный механизм персистенции / латентности вируса. Med Microbiol Immunol (Berl) 193: 83–90.
  33. 33. Feuer R, Ruller CM, An N, Tabor-Godwin JM, Rhoades RE и др.(2009) Устойчивость вирусов и хроническая иммунопатология в центральной нервной системе взрослых после инфицирования вирусом Коксаки в неонатальном периоде. J Virol 83: 9356–9369.
  34. 34. Дей Д., Хан Л., Бауэр М., Санада Ф., Оикономопулос А. и др. (2013) Анализ молекулярных взаимоотношений между различными кардиогенными клетками-предшественниками. Circ Res 112: 1253–1262.
  35. 35. Magenta A, Avitabile D, Pompilio G, Capogrossi MC (2013) c-kit-Positive кардиальные клетки-предшественники: сердце стволовости.Circ Res 112: 1202–1204.
  36. 36. Epting CL, Lopez JE, Shen X, Liu L, Bristow J, et al. (2004) Антиген-1 стволовых клеток необходим для отмены клеточного цикла и дифференцировки миобластов в клетках C2C12. J Cell Sci 117: 6185–6195.
  37. 37. Holmes C, Stanford WL (2007) Краткий обзор: антиген-1 стволовых клеток: экспрессия, функция и загадка. Стволовые клетки 25: 1339–1347.
  38. 38. Галиндо С.Л., Скиннер М.А., Эррами М., Олсон Л.Д., Уотсон Д.А. и др. (2009) Транскрипционный профиль кардиомиопатии, вызванной изопротеренолом, и сравнение с гипертрофией сердца, вызванной физической нагрузкой, и сердечной недостаточностью человека.BMC Physiol 9: 23
  39. 39. Хорвиц М.С., Брэдли Л.М., Харбертсон Дж., Крал Т., Ли Дж. И др. (1998) Диабет, вызванный вирусом Коксаки: инициирование случайным повреждением, а не молекулярной мимикрией. Nat Med 4: 781–785.
  40. 40. Kemball CC, Alirezaei M, Flynn CT, Wood MR, Harkins S, et al. (2010) Инфекция вируса Коксаки индуцирует подобные аутофагии везикулы и мегафагосомы в ацинарных клетках поджелудочной железы in vivo. J Virol 84: 12110–12124.
  41. 41. Kemball CC, Flynn CT, Hosking MP, Botten J, Whitton JL (2012) Инфекция, вызванная вирусом Коксаки дикого типа, резко изменяет численность, гетерогенность и иммуностимулирующую способность обычных дендритных клеток in vivo.Вирусология 429: 74–90.
  42. 42. Альтхоф Н., Харкинс С., Кембалл С.К., Флинн С.Т., Алирезаи М. и др. (2014) Удаление рецептора интерферона типа I из кардиомиоцитов in vivo замедляет клиренс Коксаки и ускоряет заболевание миокарда. J Virol 88: 5087–99.
  43. 43. Гуан Дж. Л., Саймон А. К., Прескотт М., Менендес Дж. А., Лю Ф. и др. (2013) Аутофагия в стволовых клетках. Аутофагия 9: 830–49.
  44. 44. ван Берло JH, Kanisicak O, Maillet M, Vagnozzi RJ, Karch J, et al.(2014) клетки c-kit + минимально вносят кардиомиоциты в сердце. Nature 509: 337–341.
  45. 45. Табор-Годвин JM, Ruller CM, Bagalso N, An N, Pagarigan RR, et al. (2010) Новая популяция миелоидных клеток, реагирующих на инфекцию, вызванную вирусом Коксаки, способствует распространению вируса в ЦНС новорожденных. J Neurosci 30: 8676–8691.
  46. 46. Feuer R, Mena I, Pagarigan R, Slifka MK, Whitton JL (2002) Статус клеточного цикла влияет на репликацию, персистентность и реактивацию вируса Коксаки in vitro.J Virol 76: 4430–4440.
  47. 47. Knowlton KU, Jeon ES, Berkley N, Wessely R, Huber S (1996) Мутация в puff области VP2 ослабляет миокардитный фенотип инфекционной кДНК варианта Вудраффа вируса Коксаки B3. J Virol 70: 7811–7818.


| Введение | Обновления пикорнавируса | Номенклатура энтеровирусов | Профиль энтеровируса | Вирус Коксаки B |


| Энтеровирус 71 | Прогресс на пути к искоренению полиомиелита | Полезные ссылки в Интернете | Карты патогенов | Ссылки |

Электронный микроскоп, просвечивающий отрицательно окрашенный подготовка коксаки Б.

Вирусы Коксаки B относятся к роду энтеровирусов (ссылка) и являются наиболее частым возбудителем миокардита и дилатационной кардиомиопатии составляющие 50% инфекций. Миокардит — редкое заболевание, которое встречается только у 1% населения Америки. Миокардит преимущественно поражает мужчин среднего возраста со средним возрастом начала заболевания около 42 лет. Инкубационный период большинства вирусов Коксаки инфекции длится от двух до десяти дней и появляются сердечные симптомы обычно возникает через две недели после вирусной инфекции.Коксаки Б вирусы, как и большинство энтеровирусов, передаются фекально-орально и через прямой контакт с выделениями слизистой оболочки.

Симптомология и результат:

Инфекция Коксаки B характеризуется лихорадкой, утомляемостью, недомоганием и боли в груди. Заражение сердца вирусом Коксаки B может привести к вирусному миокардит. Вирусный миокардит — воспалительное заболевание сердца. что может привести к сердечной недостаточности. Хотя болезнь обычно не протекает. причиной смерти, 20% случаев повторного возникновения и постоянного сердечного приступа Обычно это приводит к повреждению.

Патогенез:

Вирус Коксаки B первоначально реплицируется в кишечнике, селезенке и в конечном итоге распространяется на свой орган-мишень, сердце. Однажды в сердце репликация вируса вызывает повреждение клеток сердца и вызывает миграция лейкоцитов в ткань сердца. Белая кровь клетки впоследствии активируют аутоиммунный процесс, при котором белая кровь клетки убивают инфицированные вирусом клетки сердца и нормальные клетки сердца, которые не заражен.Этот аутоиммунный процесс сохраняется еще долго после вирусных частиц. больше не обнаруживаются. Разрушение и повреждение сердечных клеток приводит к миокардиту и сердечной недостаточности.

Профилактика и лечение:

Хотя заражение вирусом Коксаки невозможно предотвратить, его можно контролируемый с помощью санитарных мер. Поскольку вирус передается фекально-оральным путем, распространение вирус можно ограничить улучшением санитарии и тщательной промывкой Руки.

Миокардит можно лечить, уменьшая воспаление с помощью анальгетиков и тем самым ограничивая количество возникающих сердечных повреждений.Потому что миокардит нарушает работу сердца, деятельность должна быть ограничена и следует избегать чрезмерного потребления соли с пищей. Кислород тоже может быть для уменьшения нагрузки на сердце и при сердечной недостаточности, могут быть выполнены пересадки сердца.

Семья из трех человек заболела симптомами Covid-19. У кого это есть?

20-летний мужчина беспокойно передвигался на каталке в отделении неотложной помощи Гринвичской больницы в Гринвиче, штат Коннектикут, 14 марта.Ему было трудно устроиться поудобнее. Голова болела; его губы и рот казались горящими. Его руки были слишком опухшими, чтобы их сжимать, а кожа и мышцы по всему телу чувствовали себя нежными и болезненными. Двумя днями ранее его мать забрала его из университета недалеко от Филадельфии, который был закрыт из-за пандемии Covid-19. У некоторых из его друзей были признаки болезни, похожей на болезнь Ковида, и молодой человек и его мать были обеспокоены этим.

Как только она увидела его, она поняла, что он болен.Его лицо было бледным и вспотевшим. Его кожа была горячей; его глаза остекленели от лихорадки. Она надела маску, а затем отвезла его домой. Как только он благополучно оказался в своей спальне, она позвонила в колл-центр Йельского университета по Covid-19, чтобы узнать, что делать дальше. К тому времени, несколькими днями ранее, 8 марта, был зарегистрирован первый случай Covid-19 в Коннектикуте. Учитывая его вероятное заражение в школе и лихорадку там и сейчас дома, ее сын соответствовал критериям человека, который должен пройти тестирование. ей сказали. Тестирование в местном автосервисе он смог пройти не раньше, чем через три дня, 15 марта.А пока она должна предположить, что ее сын инфицирован вирусом и должен быть помещен в карантин.

Прежде чем он смог добраться до проезжей части, ему стало хуже. На следующий день после возвращения домой, 13 марта, он потерял аппетит, и вокруг носа, рта и подбородка появилась странная красная сыпь. На следующее утро, когда у него началась рвота, мать отвезла его в больницу.

В больнице

В реанимации у молодого человека не было температуры. Остальная часть его осмотра прошла нормально, за исключением сыпи на лице, руках и спине.Волдыри — и круглые красные раны, в которые они превратились — были болезненными, и ему было трудно говорить, есть или даже пользоваться руками. Медсестра в маске вернулась с новостями от E.D. Врач: Его должны были принять. Они проверит его на Covid-19. Сыпь, которая у него была, не была типичной для этой инфекции, хотя им еще многое предстоит узнать о ней.

Его сыпь больше походила на герпетическую инфекцию или болезнь рук, ящура, инфекцию, обычно вызываемую вирусом Коксаки и чаще всего обнаруживаемую у маленьких детей, а иногда и у подростков.Когда медсестра объяснила это матери и сыну, у матери начался продолжительный приступ кашля. «Последние несколько дней у меня першило в горле», — объяснила она медсестре, извиняясь за то, что помешала.

«Мне не нравится этот кашель», — ответила медсестра. Ей действительно стоит поговорить со своим врачом о тестировании на Covid-19.

Невероятно осторожная

Мать не могла поверить, что у нее могла быть эта вирусная инфекция. Она была очень осторожна.В конце февраля она начала носить маски и перчатки всякий раз, когда выходила из дома. Люди смотрели на нее так, будто она сошла с ума от такой защиты, но ей было все равно. Она протерла все дезинфицирующим средством, прежде чем принести это в дом и оставить пальто и обувь в прихожей. Она мыла руки десятки раз в день и мыла счетчики и клавиатуру до и после каждого использования. Она ухаживала за своей 91-летней матерью, которая жила всего в квартале от дома, и боялась, что семейный матриарх заболеет.Ее мать изолировала себя, когда первые случаи заболевания поразили Нью-Йорк, и зависела от дочери во всем, что ей было нужно от внешнего мира.

Женщина подозревала, что ее муж был не так осторожен, как она. Он ехал на поезде Metro North в Нью-Йорк по работе. На нем не было маски, но, по его словам, он часто мыл руки и носил перчатки, когда находился вне дома или офиса. Но он кашлял последнюю неделю или около того. У него не было ни температуры, ни одышки.У него просто был небольшой кашель, который, по его словам, ничего не значил.

Попытка пройти обследование

У нее тоже был кашель, который начался за несколько дней до ее посещения с сыном в E.D. 14 марта. Неделей ранее у нее заболела голова, похожая на гайморит. 10 марта она обратилась в поликлинику, где врач прописал ей антибиотик азитромицин. Когда это не помогло, и когда ее сын был дома в постели, она снова обратилась за неотложной помощью, и ей дали второй антибиотик.Это тоже не помогло. Теперь медсестра, которая ухаживала за ее сыном в E.D. предложила пройти тестирование на Covid-19, подтвердив ее худшие опасения.

На следующее утро, 15 марта, женщина снова набрала номер информационного центра Йельского университета. Она рассказала о своей головной боли, кашле и больном сыне. Голос по телефону терпеливо объяснил, что она не соответствует их критериям для тестирования, хотя ее сын может быть болен Covid-19. Ей следует просто предположить, что она у нее есть, и изолировать себя на 14 дней.

Женщина повесила трубку, обескураженная. Она сказала мне, что очень важно знать наверняка, болела ли она. Она снова набрала номер, и ей ответил другой голос. Она снова описала свои симптомы и своего больного сына. Голос спросил, не было ли у нее лихорадки. Женщина заколебалась. У нее не было температуры, но она подозревала, что, если она скажет это еще раз, ее не будут проверять. Да, сказала она женщине по телефону. Она поговорила с врачом, который сказал ей, что ей нужно будет пройти обследование. Она может пойти в испытательный центр в Уотербери.Но результатов не будет еще несколько дней.

Сын, отец

Сын пробыл в больнице три дня. К моменту выписки 17 марта его тест на Covid-19 все еще не вернулся, но врачи подозревали, что у него, вероятно, болезнь рук, ящура и рта. Это инфекция, состоящая из субфебрильной температуры и высыпания мелких волдырей, которые вскрываются, а затем заживают в течение нескольких дней. Обычно они ограничиваются ртом, но могут распространяться на руки и ноги, а иногда и на туловище и ягодицы.Это довольно заразно, но по непонятным причинам взрослые редко заболевают. Через несколько дней их гипотеза подтвердилась: тест на Covid был отрицательным, а тест на вирус Коксаки — положительным.

Теперь, когда ее сын был дома, целью матери было держаться от него подальше, пока она не узнает наверняка, есть ли у нее Covid-19. Она также переехала в другую спальню, чтобы отделиться от мужа. Но на следующий день после того, как она привезла сына из больницы домой, ее муж сказал ей, что собирается в отделение неотложной помощи.Он сказал, что чувствовал себя ужасно, очень тяжело дыша. Он собрал небольшой чемодан на случай, если останется.

Ему пришлось остаться. Его уровень кислорода был низким, и рентген грудной клетки показал, что у него пневмония в обоих легких. Ему сказали, что он, вероятно, болен Covid-19. Его поместили в изолятор. Время от времени приходил один из его врачей, хотя в основном он разговаривал с ними по телефону. Результаты его теста на Covid-19 и теста его жены были получены в тот же день — 19 марта. Оба были положительными.Он пробыл в больнице почти неделю. И когда ему пора было возвращаться домой, его жена так волновалась, что он может заразить их сына, что вместо этого он переехал в маленькую квартирку, которая у них была в городе.

Становление лучше

Головная боль жены постепенно уменьшалась, как и ее кашель. У нее никогда не было лихорадки. Она уверена, что заразилась вирусом от мужа. Он задается вопросом, получил ли он это от нее; он думает, что его кашель начался после нее. Они, вероятно, никогда не узнают, откуда это взялось.Что касается их сына, если бы у него была такая же сыпь и история болезни примерно в любое другое время, диагноз болезни рук, ящура и рта был бы очевиден. Но в этой эпидемии с ошибкой, о которой мы все еще так мало знаем и которая распространяется так быстро, все может выглядеть, по крайней мере сначала, очень похоже на Covid-19.

Понимание вируса Коксаки | FastMed Urgent Care

Вирус Коксаки обитает в пищеварительном тракте человека и легко передается от человека к человеку через немытые руки или поверхности.Поскольку вспышки вируса Коксаки чаще всего происходят летом и осенью, сейчас идеальное время, чтобы научить себя и своих детей тому, как это предотвратить.

Что такое вирус Коксаки?

Снова в школу — захватывающее время для большинства детей. Но как родитель вы можете беспокоиться о здоровье своего ребенка, когда он снова входит в мир общих карандашей, общих столов и общих микробов.

Хотя взрослые и дети старшего возраста могут заразиться вирусом Коксаки, обычно он поражает маленьких детей, у которых еще не сформировался иммунитет.

Вирус Коксаки , широко известный как болезнь рук, ног и рта , представляет собой тип энтеровируса . К другим энтеровирусам относятся миокардит, герпангина и плевродиния. В большинстве случаев симптомы вируса Коксаки проходят в течение недели или двух и не представляют серьезной угрозы для здоровья ребенка.

Симптомы вируса Коксаки включают:

  • Боль в суставах
  • Боль в горле
  • Лихорадка
  • Сыпь
  • Головная боль

Как распространяется вирус Коксаки?

Вирус Коксаки распространяется, когда человек вступает в прямой контакт с инфицированным человеком:

  • Слюна
  • Кал
  • Выделения из горла или выделения из носа
  • Капли из дыхательных путей (при кашле или чихании)
  • Блистерная жидкость

Ребенок может заразиться вирусом Коксаки при контакте с другим ребенком, у которого есть вирус Коксаки, или при прикосновении к незащищенным поверхностям, к которым прикоснулся инфицированный ребенок.

Предотвращение распространения вируса Коксаки

По данным Mayo Clinic, « Ящура, связанная с руками и ртом, чаще всего встречается у детей в детских учреждениях из-за частой смены подгузников и приучения к горшку, а также из-за того, что маленькие дети часто кладут руки в рот».

К счастью, соблюдение правил гигиены и дезинфекция общих пространств обычно бывает достаточно, чтобы предотвратить распространение вируса Коксаки. Поэтому важно научить детей, воспитателей и учителей важности частого мытья рук, особенно после посещения туалета.

Когда обращаться к врачу

Как уже упоминалось, большинство случаев вируса Коксаки протекает в легкой форме, и симптомы можно минимизировать с помощью:

  • Достаточно отдыхать
  • Обильное питье
  • Прием безрецептурных болеутоляющих, таких как тайленол или ибупрофен

Однако в редких случаях вирус Коксаки может вызывать серьезные проблемы со здоровьем, включая вирусный менингит и энцефалит.

Если симптомы вашего ребенка длятся дольше нескольких дней или если он жалуется на сильную головную боль, немедленно обратитесь к врачу.

В FastMed Urgent Care мы стремимся предоставлять качественную медицинскую помощь, которая является быстрой, удобной и доброжелательной. Вот почему FastMed открыт семь дней в неделю с расширенными вечерними и выходными часами.

Если у вашего ребенка проявляются симптомы вируса Коксаки, принесите его в ваш район FastMed ! Мы готовы помочь, и в наших клиниках есть возможности для лабораторного тестирования, поэтому мы можем быстро диагностировать проблемы и быстро лечить вас и вашего ребенка.

———-
Источники:

Healthychildren.org: https://www.healthychildren.org/English/health-issues/conditions/infections
Клиника Мэйо: https://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/hand-foot-and-mouth- болезнь / основы / причины

Цитотоксичность вируса Коксаки B3 связана с блокированием аутофагического потока, опосредованным снижением экспрессии синтаксина 17

Культура клеток и трансфекция

Клетки HeLa культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; Invitrogen Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (Sigma-Aldrich Corp., Сент-Луис, Миссури, США) и 50 мкг / мл пенициллина и стрептомицина (обычная среда) в атмосфере, содержащей 5% CO 2 . Клетки временно трансфицировали с использованием реагента Lipofectamine 2000 (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) плазмидами Myc-STX17, mRFP-GFP-LC3 или миРНК в соответствии с протоколом производителя.

Вирусная инфекция

Клетки HeLa контактировали с CVB3 при MOI 10 (низкий MOI) или 50 (высокий MOI) в течение 1 часа в бессывороточной среде DMEM для достижения инфекции.Эквивалентное количество физиологического раствора с фосфатным буфером (PBS) использовали для фиктивной инфекции. Затем клетки промывали PBS и культивировали в полной среде в течение указанного периода времени, пока они не были собраны.

Иммунофлуоресценция

Клетки, выращенные на покровных стеклах, промывали PBS и фиксировали в 4% параформальдегиде в PBS в течение 10 мин при 4 ° C. Фиксированные клетки пермеабилизировали 50 мкг / мл дигитонина в PBS в течение 5 минут, блокировали 3% бычьим сывороточным альбумином в PBS в течение 30 минут и инкубировали с LC3-реактивным антителом (# 3868, Cell signaling Tech, Danvers, MA, США) на 1 час.После отмывки клетки инкубировали с конъюгированным с Alexa Fluor 488 антителом против кроличьего IgG (Invitrogen Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) в течение 30 мин. Изображения были получены под конфокальным лазерным микроскопом (FV1000D IX81, Olympus, Corporation, Shinjuku-ku, Токио, Япония) с использованием масляно-иммерсионного объектива 60x с числовой апертурой (NA) 1,42 и 1,5-кратным увеличением, и захвачены с использованием Программное обеспечение Fluoview (Olympus, Corporation, Синдзюку-ку, Токио, Япония). Размер изображения был установлен 1024 × 1024 пикселей.

Иммуноблоттинг

Клетки лизировали лизисным буфером, содержащим 1% Triton X-100, и полученные образцы разделяли электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и переносили на поливинилидендифторидные мембраны Immobilon-P (Millipore Corporation, Биллерика, Массачусетс, США). Иммуноблот-анализ выполняли и визуализировали с использованием хемилюминесцентного субстрата Super-Signal West Pico (Pierce Chemical Co., Рокфорд, Иллинойс, США) или субстрата Immobilon Western Chemiluminescent HRP (Millipore Corporation, Биллерика, Массачусетс, США).Интенсивность сигналов анализировали с использованием мини-анализатора изображений LAS-3000 и программного обеспечения Multi Gauge, версия 3.0 (Fujifilm, Токио, Япония).

Измерение активности катепсина B / L

Анализ активности катепсина B / L на основе клеточного лизата проводили с использованием набора для анализа ab65300 для катепсина B и набора для анализа ab65306 для катепсина L (оба от Abcam Plc., Кембридж, Массачусетс, США) согласно протоколу производителя. Вкратце, клетки лизировали в буфере M2 и полученный лизат инкубировали с 50 мкМ флуорогенного субстрата катепсина B / L (Z-RR-AMC или Ac-HRYR-ACC, соответственно) в бесклеточной системе, содержащей буфер (10 мМ HEPES- NaOH, pH 7.4, 220 мМ маннита, 68 мМ сахарозы, 2 мМ NaCl, 2,5 мМ KH 2 PO 4 , 0,5 мМ EGTA, 2 мМ MgCl 2 , 5 мМ пирувата, 0,1 мМ PMSF и 1 мМ дитиотреитола) в 96-луночный планшет в течение 1 ч при 37 ° C. Интенсивность флуоресценции контролировали с помощью флуорометра (ThermoFisher Scientific Inc., Уолтем, Массачусетс, США) при длине волны возбуждения 400 нм и длине волны испускания 505 нм.

Данные представляют собой относительную интенсивность флуоресценции по сравнению с контрольной группой.

Обнаружение белков, растворимых в Triton X-100 и не растворимых в Triton X-100

Клетки лизировали на льду в течение 10 мин в 0,1% Triton X-100 в буфере ТЕМ (20 мМ NaCl, 20 мМ Tris-HCl, pH 7,4, 5 мМ MgCl ( 2 , 0,1 мМ ЭДТА), используя гомогенизатор Даунса, и полученные общие клеточные экстракты центрифугировали при 16000 × g в течение 15 минут для разделения растворимых (супернатант) и нерастворимых (осадок) фракций. Обе фракции подвергали SDS-PAGE и иммуноблоттингу с антителом против мультиубиквитина (№ 3936, Cell signaling Tech, Danvers, MA, USA).

Электронная микроскопия

Клетки HeLa фиксировали в 2,5% глутаровом альдегиде в 0,1 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,4, при 37 ° C в течение 2 ч, а затем дегидратировали в серии градиентных этанолов и заливали. Ультратонкие срезы размером примерно 70 нм были закреплены на никелевых решетках. Затем образцы окрашивали и визуализировали с помощью электронного микроскопа Jeol на 120 кВ (JEM-1400, JEOL Ltd, Акишима, Токио, Япония) при 80 кВ. Изображения были получены с помощью цифровой камеры Gatan-832.

ПЦР в реальном времени

Общую РНК экстрагировали с использованием реагента TRIzol в соответствии с инструкциями производителя, расщепляли ДНКазой (Invitrogen Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США), экстрагировали фенол-хлороформом и осаждали этанолом для удаления загрязнение ДНК.Суммарную РНК (2,5 мкг) из образцов клеток, инфицированных ложно и CVB3, подвергали обратной транскрипции с использованием случайных гексамеров и обратной транскриптазы SuperScript (Invitrogen Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США). Количества кДНК нормализовали к 18S рРНК. Были использованы следующие праймеры: прямой STX17, 5′-ATGTGTGTGGAGAGCGTCAA-3 ‘и обратный, 5′-ACAGTTC CACAAAGGCATCC-3′; Lamp1 вперед, 5’-GAGCGCTTCAGTTCAGCTTT-3 ‘и назад, 5′-CCCTTGAGCTGCAGACATTA-3′; Cyr61 прямой, 5’-CACTAATGCAGC CACGATTG-3 ‘и обратный, 5′-CATCAACTCCACAAGCTCCA-3’.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *