Шоколад для женщин возбудитель: шоколад для женщин возбудитель

«Сейчас это большое недостающее звено», — говорит Ламберт The Salt. Теперь мы знаем, что кишечные бактерии могут расщеплять какао на соединения, которые оказывают благотворное влияние на сердечно-сосудистую систему, — говорит он. Но мы еще не знаем, являются ли они критическими в крови.

А пока я буду баловать кишечные бактерии дополнительными кубиками темного шоколада каждый день. Похоже на беспроигрышную ситуацию для нас обоих.

Какао CRISPR: редактирование генов обещает улучшить «шоколадное дерево»

UNIVERSITY PARK, PA. — Использование мощного инструмента редактирования генов CRISPR-Cas9 может помочь развести деревья какао, которые проявляют желаемые черты, такие как повышенная устойчивость к болезням , по словам ученых-растениеводов Пенсильванского университета.

Дерево какао, которое растет в тропических регионах, производит какао-бобы, которые являются сырьем для шоколада.Надежная продуктивность растений какао имеет важное значение для многомиллиардной шоколадной промышленности, экономики стран-производителей и средств к существованию миллионов мелких фермеров, выращивающих какао.

Но каждый год несколько болезней растений серьезно ограничивают мировое производство, при этом 20-30 процентов какао-стручков уничтожаются перед сбором урожая, отмечает ведущий автор Эндрю Фистер, доктор наук в области растениеводства, Колледж сельскохозяйственных наук, Пенсильванский государственный университет.

«В Западной Африке серьезные вспышки грибковых заболеваний могут уничтожить все плоды какао на одной ферме», — сказал Фистер.«Поскольку болезни являются постоянной проблемой для какао, повышение устойчивости к болезням было приоритетной задачей для исследователей. Но создание устойчивых к болезням сортов было замедлено из-за необходимости в источниках генетической устойчивости и длительного времени генерации деревьев какао».

Исследователи недавно сообщили в Frontiers in Plant Science о результатах исследования, которые, как считалось, впервые продемонстрировали возможность использования передовой технологии CRISPR для улучшения Theobroma cacao.

CRISPR обозначает кластерные короткие палиндромные повторы с регулярными интервалами. Это способ модификации генома организма путем точной доставки фермента, расщепляющего ДНК, Cas9, в целевой участок ДНК. В результате изменения могут быть удалены или заменены определенные части ДНК, тем самым улучшив или отключив определенные черты.

Предыдущая работа с какао идентифицировала ген, известный как TcNPR3, который подавляет реакцию растения на болезнь. Исследователи предположили, что использование CRISPR-Cas9 для нокаута этого гена приведет к повышению устойчивости к болезням.

Эндрю Фистер, доктор наук в области растениеводства, стоит среди деревьев какао в африканской стране Кот-д’Ивуар. Желто-черные стручки заражены болезнью черных стручков.

Чтобы проверить свою гипотезу, они использовали Agrobacterium — растительный патоген, модифицированный для устранения его способности вызывать заболевание — для введения компонентов CRISPR-Cas9 в отделенные листья какао. Последующий анализ обработанной ткани обнаружил делеции в 27 процентах копий TcNPR3.

При заражении Phytopthera tropicalis, естественным патогеном какао и других растений, обработанные листья показали большую устойчивость к этому заболеванию.Результаты показали, что мутации только части копий гена-мишени может быть достаточно для запуска последующих процессов, приводящих к системной устойчивости растения к болезням.

Исследователи также создали отредактированные геном CRISPR зародыши какао, из которых они будут выращивать зрелые деревья, чтобы проверить эффективность этого подхода на уровне всего растения.

Это исследование основано на более чем 30-летних биотехнологических исследованиях, направленных на создание лучшего дерева какао, по словам старшего автора Марка Гилтинана, профессора молекулярной биологии растений и руководителя исследовательской программы какао штата Пенсильвания.

«Наша лаборатория разработала несколько инструментов для улучшения какао, и CRISPR — всего лишь еще один инструмент», — сказал он. «Но по сравнению с традиционным разведением и другими методами CRISPR ускоряет процесс и является гораздо более точным. Он удивительно эффективен в нацеливании на нужную вам ДНК, и до сих пор мы не обнаружили никаких побочных эффектов».

Помимо предоставления нового инструмента для ускорения селекции, технология CRISPR-Cas9 может помочь глубже понять основы биологии, предлагая метод эффективной оценки функции генов, заявили исследователи.

«С помощью CRISPR мы можем быстро« сломать »ген и посмотреть, что происходит с растением», — пояснил Гилтинан. «У нас есть список генов, которые мы хотим проверить».

По словам Фистера, в устойчивость к болезням вовлечены тысячи генов.

«Мы хотим оценить как можно больше», — сказал он.

Конечная цель исследований какао в Пенсильвании — помочь поднять уровень жизни мелких фермеров и стабилизировать поставку какао, находящуюся под угрозой, путем создания растений, которые могут противостоять болезням, изменению климата и другим проблемам, по словам соавтора Сиелы Максимовой, старшего научного сотрудника. и профессор садоводства.

«Любое увеличение производства за последние 20 лет в основном связано с вводом в производство большего количества земель», — сказала Максимова, соруководитель программы исследований какао. «Но земля, вода, удобрения и другие ресурсы ограничены. Для повышения устойчивости нам нужны растения, которые будут более сильными и устойчивыми к болезням, и которые производят больше бобов лучшего качества.

«Это исследование представляет собой« доказательство концепции »того, что технология CRISPR-Cas9 может быть ценным инструментом в усилиях по достижению этих целей», — сказала она.

Лена Ландхерр Шеффер, научный сотрудник в области растениеводства, Пенсильвания, также была соавтором статьи.

Эта работа была поддержана Государственным колледжем сельскохозяйственных наук Пенсильвании, Институтом наук о жизни Хака, Благотворительной программой штата Пенсильвания по молекулярной биологии какао, Национальным научным фондом и Национальным институтом продовольствия и сельского хозяйства США. .

• Мертвый, засохший стручок какао, пораженный возбудителем черной стручковой гнили.

  ИЗОБРАЖЕНИЕ: Эндрю Фистер / Penn State

Текущее понимание и новые перспективы исследования болезней метлы какао-ведьм

Образец цитирования: Teixeira PJPL, Thomazella DPdT, Pereira GAG (2015) Время для шоколада: современное понимание и новые перспективы исследования болезней метелок какао-ведьм. PLoS Pathog 11 (10): e1005130. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005130

Редактор: Джозеф Хейтман, Медицинский центр Университета Дьюка, США

Опубликован: 22 октября 2015 г.

Авторские права: © 2015 Teixeira и другие.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

Финансирование: Исследование болезни ведьм. в лаборатории Перейры поддерживается Исследовательским фондом Сан-Паулу (FAPESP, грант 09 / 50119-9) и Национальным советом по научному и технологическому развитию (CNPq, грант 475535 / 2013-8). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Theobroma cacao — это тропическое подлесное дерево, которое является одной из самых важных многолетних культур в сельском хозяйстве. Какао-бобы ценились древними цивилизациями в Мезоамерике более 3000 лет, а теперь они поддерживают многомиллиардную промышленность, которая занимается производством и коммерциализацией шоколада, удовольствия, которое ценится во всем мире. Дерево какао родом из тропических лесов Амазонки и в настоящее время выращивается более чем в 50 странах во влажных тропиках, служа основным источником дохода для более чем 40 миллионов человек. Ежегодно производится более 3 миллионов тонн какао-бобов, в основном мелкими фермерами в районах с высоким биоразнообразием. Примечательно, что какао-дерево не требует прямого солнечного света и естественно растет под пологом других, более высоких деревьев. Эта характеристика часто побуждает фермеров сохранять существующие леса и сажать дополнительные деревья для укрытия своих растений какао [1], тем самым снижая воздействие выращивания какао на окружающую среду. Несмотря на большое значение, дерево какао поражено рядом неизлечимых болезней, которые сокращают производство фруктов и угрожают нашим глобальным поставкам какао.Среди них болезнь ведьм метлы (WBD) выделяется как одна из самых серьезных проблем, поражающих эту культуру, на которую приходится до 90% производственных потерь.

WBD — разрушительное тропическое заболевание

WBD было впервые описано в 1785 году натуралистом Александром Родригешем Феррейрой во время его эпической экспедиции через бассейн Амазонки. Это заболевание в настоящее время присутствует почти во всех странах-производителях какао в Северной и Южной Америке, и оно значительно снижает производство фруктов и качество бобов, что делает его основным ограничивающим фактором для выращивания какао.Яркий пример разрушительного воздействия ВБД произошел в Бразилии [2], которая к концу 1980-х годов была одним из крупнейших экспортеров какао. Внедрение болезни в ее основной производственный район (штат Баия) в 1989 г. снизило производство на 70%, превратив страну в нетто-импортера какао-бобов. В результате многие фермы были заброшены, а рабочие были вынуждены переехать в города, которые не были готовы принять такую ​​миграцию, что привело к сценарию крайней нищеты и нищеты, который сохраняется и сегодня.Более того, большая часть тропических лесов Атлантики, которые защищали фермы какао, была заменена пастбищами. Спустя почти три десятилетия после появления ВБД в Баии производство какао в Бразилии еще не оправилось от значительного негативного воздействия этой болезни, и в 2013 году оно составило лишь 65% от того, что было произведено в 1989 году. К счастью, ВБД по-прежнему отсутствует в Западной Африке. , на долю которого в настоящее время приходится почти 70% всего производимого в мире какао. Однако распространение этого заболевания в африканских странах представляет собой реальную угрозу, которая уничтожит мировую шоколадную промышленность и нанесет серьезный социально-экономический ущерб.Это особенно актуально, потому что большая часть выращиваемого в Африке какао принадлежит к очень восприимчивой генетической группе «амелонадо».

WBD вызывается специфическим грибковым патогеном

Болезнь ведьм метлы вызывается базидиомицетом Moniliophthora perniciosa . Этот патоген ведет гемибиотрофный образ жизни, что означает, что он сначала растет на живых тканях какао (биотрофная стадия), а затем убивает мертвую ткань и питается ею (некротрофная стадия) [3].По сравнению с другими гемибиотрофными взаимодействиями, M . Жизненный цикл perniciosa считается атипичным. В то время как у большинства гемибиотрофов наблюдается короткая и бессимптомная биотрофная стадия (длящаяся всего несколько дней), M . perniciosa устанавливает долгосрочное биотрофное взаимодействие с какао, которое длится от одного до трех месяцев и отвечает за основные симптомы заболевания. Эти симптомы включают гиперплазию и гипертрофию инфицированных тканей, потерю верхушечного доминирования и разрастание подмышечных отростков, что приводит к образованию аномальных стеблей, называемых зелеными метлами.В конце концов, зеленый веник некротизируется и умирает, а после чередования дождливых и засушливых периодов сухие метлы производят базидиомы, завершая жизненный цикл грибов (рис. 1). Примечательно, что инфицирование апикальной и подмышечной меристем побегов приводит к наиболее характерным симптомам WBD. Однако M . perniciosa может также инфицировать другие части растения, включая развивающиеся цветы и плоды.

Рис. 1. Жизненный цикл Moniliophthora perniciosa в Theobroma cacao .

Заражение начинается, когда грибковые базидиоспоры проникают в растение через устьица или раны. В первой стадии болезни М . perniciosa развивается как набухший монокариотический мицелий, который растет исключительно во внеклеточном пространстве живой ткани растения. Заражение побегов вызывает резкие морфологические изменения, приводящие к характерной структуре «зеленого веника», хотя инфекция также может возникать в других тканях (плоды и цветы). После одного-трех месяцев биотрофного заражения происходит некроз растительной ткани, в результате чего возникает структура «сухой метлы».Некротическая ткань колонизируется внутриклеточно тонким дикариотическим мицелием, который характеризуется наличием зажимных соединений — поперечной структуры, образованной клетками гиф, которая обеспечивает присутствие двух ядер в каждой клетке гриба. После чередования дождливых и засушливых периодов из некротрофных гиф образуются базидиомы, завершая жизненный цикл патогена. Иллюстрации Дианы Карнейро.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005130.g001

Для вторжения в растение-хозяин, M . perniciosa не образует специализированных инфекционных структур (например, аппрессорий), но проникает в ткани какао через раны и устьица. Проросшие базидиоспоры образуют набухшие монокариотические гифы, которые растут межклеточно и питаются питательными веществами, полученными из апопласта растения. В отличие от многих (полу) биотрофов, M . perniciosa не использует структуры, поглощающие питательные вещества (например, гаусторий и инвазивные гифы), и манипулирует метаболизмом хозяина, чтобы увеличить доступность питательных веществ в месте инфекции.На поздних стадиях WBD, M . perniciosa растет внутриклеточно как некротрофный мицелий, который является дикариотическим и демонстрирует зажимные соединения для переноса ядра (Рис. 1) [4].

Помимо интересного жизненного цикла, у M есть и другие замечательные особенности. perniciosa биология и патогенность. Несмотря на патогенный образ жизни, M . perniciosa принадлежит к семейству Marasmiaceae, которое известно своими преимущественно сапротрофными видами (рис. 2).Интересно, что ближайший к вид M . perniciosa эволюционно, M . roreri , также является патогеном какао, который поражает исключительно плоды хозяина. Род Moniliophthora также включает эндофит травы, который был изолирован в Нью-Мексико, что позволяет предположить, что патогенный образ жизни в этой группе, возможно, произошел от биотрофного предка [5]. Совсем недавно сапротрофный вид Moniliophthora , названный M . canescens , выделен в Азии [6]. Необходимо идентифицировать и охарактеризовать еще видов Moniliophthora , чтобы полностью подтвердить гипотезы относительно эволюции патогенности в этом роде. Тем не менее, M . perniciosa и родственные ему виды Marasmiaceae представляют собой очень интересную модель, с помощью которой можно понять эволюцию патогенности грибов.

Рис. 2. Патогенный образ жизни M . perniciosa является исключением в семействе базидиомицетов Marasmiaceae, которое в основном состоит из сапротрофных подстилок и древесно-разлагающих грибов.

Род Moniliophthora включает гемибиотрофных сестринских видов M . perniciosa и M . roreri , два основных патогена Theobroma cacao . Примечательно, что он также включает все еще плохо охарактеризованный эндофит травы, что свидетельствует о патогенном образе жизни M . perniciosa , возможно, произошел от предка эндофита. Дерево было построено на основе байесовского вывода с использованием областей генов 25S, 18S, ITS / 5.8S и Rbp1 (большой фрагмент РНК-полимеразы II). Последовательности были получены из Aime & Phillips-Mora (2005) [5] и Matheny et al. (2006) [34]. Числа рядом с ветвями представляют апостериорные вероятности. В качестве внешней группы использовали вид Schizophyllum radiatum .

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005130.g002

Также интригует тот факт, что, помимо какао, M . perniciosa обнаруживается в ассоциации с другими видами растений из рода Theobroma и у растений из неродственных семейств, таких как Solanaceae. Исходя из этого, M . perniciosa классифицируется на три биотипа в соответствии со специфичностью хозяина: C-биотип поражает растения семейства Malvaceae (например, какао), S-биотип заражает членов семейства Solanaceae (например, помидоры) и L-биотип. встречается в ассоциации с членами семейства Bignoniaceae (например, лианами) [7–9]. Примечательно, что нет никаких доказательств того, что эти биотипы представляют собой отдельные виды. В частности, биотипы C и S кажутся очень близкими генетически и даже вызывают сходные симптомы у растения-хозяина, указывая на то, что они могут использовать стратегии консервативной патогенности.Несмотря на очевидную научную значимость, механизмы, связанные с адаптацией хозяина, все еще плохо изучены и, таким образом, представляют собой интересную тему для будущих исследований.

Важные достижения в исследованиях ВБД

ВБД находится в центре внимания научного сообщества в течение нескольких десятилетий. Ранние исследования, проведенные в основном в 1980-х и 1990-х годах, имели большое значение для установления базовых знаний о биологии M . perniciosa , включая характеристику его гемибиотрофного образа жизни и процесса инфицирования какао [3,4,10–12].Молекулярно-биологические исследования этого патогена начались в основном с проекта WBD Genome Project, инициативы, запущенной бразильскими лабораториями в 2000 году, которая представила первые последовательности ДНК M . perniciosa [13]. Эта инициатива выявила ряд грибковых генов с потенциальной ролью в WBD, которые были в центре внимания нескольких конкретных исследований [14–18]. Точно так же последовательность генома какао была выпущена в 2010 году и стала ценным ресурсом для исследований WBD [19,20].

До середины 2000-х годов наши знания о взаимодействии между T . cacao и M . perniciosa была довольно зарождающейся. В 2005 году всесторонняя биохимическая характеристика прогрессирования WBD предоставила первую большую картину этой сложной патосистемы [21]. Последующие исследования также расширили наши знания о различных аспектах заболевания, в том числе о важности растительных сахаров как сигнальных молекул в WBD, механизмах, регулирующих процесс фазового перехода в M . perniciosa и роль некоторых грибных белков в M . perniciosa вирулентность [16,22,23]. В частности, NEP (белки, индуцирующие некроз и этилен) представляют собой очень интересный класс белков, поскольку они вызывают некроз в тканях растений и, по-видимому, играют важную роль в гибели тканей какао во время развития WBD [18,24]. . Примечательно, что Tiburcio et al. (2010) подтвердили, что гена NEP в M . perniciosa (и у его сестринского вида M . roreri ) были получены горизонтальным переносом от оомицетов рода Phytophthora [25].Действительно, несколько видов Phytophthora заражают какао, подтверждая идею о том, что эти оомицеты сосуществовали с предковыми видами Moniliophthora . Кажется вероятным, что приобретение генов NEP было важным событием в развитии / улучшении патогенного гемибиотрофного образа жизни у представителей рода Moniliophthora .

Другим грибковым геном, охарактеризованным в ходе исследовательской программы WBD, был ген MpAOX , который кодирует митохондриальную альтернативную оксидазу (AOX) [16]. АОХ представляет собой альтернативный респираторный путь, устойчивый ко многим ингибиторам основной дыхательной цепи, таким как защитная молекула оксида азота и стробилуриновые фунгициды. Примечательно, что биотрофный и некротрофный этапы M . perniciosa , по-видимому, задействует разные дыхательные пути: в то время как монокариотические (биотрофные) гифы используют альтернативный путь, дикариотические (некротрофные) гифы в основном полагаются на основную дыхательную цепь. Примечательно, что фармакологическое ингибирование АО полностью блокирует развитие монокариотического мицелия, тогда как дикариотическая стадия все еще может расти в присутствии ингибиторов АО.Более того, ингибирование основного дыхательного пути в монокариотических гифах задерживает переход к дикариотической стадии, указывая на то, что фазовый переход в M . perniciosa связано с энергетическим статусом клетки. Важно отметить, что двойное ингибирование основных и альтернативных дыхательных цепей блокирует развитие грибов и представляет собой многообещающую альтернативу контролю WBD [16].

Недавно двойной РНК-seq анализ биотрофной стадии WBD позволил беспрецедентно охарактеризовать транскриптомы как растения какао, так и M . perniciosa при их взаимодействии [26]. У инфицированных растений были выявлены значительные транскрипционные изменения, которые коррелируют с развитием симптомов, а также ряд предполагаемых факторов грибковой патогенности. Перепрограммирование транскрипции, связанное с гормональным метаболизмом, было замечательным и совместимо с дисбалансом ауксина, гиббереллина, цитокинина и этилена. Интересно, что ауксин-чувствительные гены сильно активируются у зеленых веников, но гены растений, необходимые для биосинтеза этого гормона, не экспрессируются по-разному.Эти данные указывают на то, что M . perniciosa может напрямую влиять на гормональный метаболизм какао, что согласуется с выводом о том, что этот гриб способен продуцировать растительный гормон ауксин [27]. Кроме того, была подтверждена четкая сигнатура депривации углерода в транскриптомах инфицированных растений, включая активацию цикла глиоксилата, деградацию липидов, биосинтез аспарагина и снижение скорости фотосинтеза. Это состояние нехватки питательных веществ, по-видимому, запускает процесс преждевременного старения в инфицированных тканях растений, который является ответственным за первые признаки некроза, наблюдаемые во время WBD.Основываясь на этом транскриптомном анализе, у нас теперь есть модель молекулярных событий, лежащих в основе биотрофной стадии WBD, а также новые представления о метаболических процессах растений, связанных с переходом к сухой / некротрофной стадии болезни.

Этот подробный транскрипционный анализ биотрофной стадии WBD является частью инициативы WBD Transcriptome Atlas (http://www.lge.ibi.unicamp.br/wbdatlas). Эта база данных включает постоянно растущий набор библиотек последовательностей РНК, охватывающих транскриптомы обоих M . perniciosa и T . cacao в различных биологических условиях (например, жизненный цикл патогена и стадии WBD). С помощью этой инициативы мы стремимся предоставить исследовательскому сообществу WBD доступ к ценному ресурсу, который может быть использован в качестве дополнительных доказательств при изучении функции генов.

Поиск устойчивых к WBD сортов

Выведение устойчивых сортов какао может быть надежным и устойчивым подходом для удовлетворения растущего спроса на какао-бобы.Генетическое улучшение устойчивости какао к болезням началось в 1930-х годах, когда Фредерик Дж. Паунд предпринял экспедицию в регион Верхней Амазонки для поиска диких деревьев какао с отсутствием симптомов ВБД. С тех пор многие из этих сортов использовались в программах селекции на устойчивость к WBD. Примечательно, что Scavina 6 (SCA6) является одним из наиболее широко используемых источников устойчивости к WBD, выявленных до сих пор. Однако из-за его плохих агрономических характеристик он не используется напрямую в качестве клона, а обычно скрещивается с другими высококачественными сортами с целью получения гибридов с устойчивостью к болезням, а также высокой урожайностью и большим весом бобов.

Хотя SCA6 был признанным источником устойчивости к WBD, он восприимчив к M . perniciosa в некоторых регионах Эквадора, Перу и Бразилии. Предполагается, что эта географическая вариабельность восприимчивости к болезням связана с региональной вариабельностью популяций патогенов. В этом отношении изучение новых сортов какао имеет важное значение для расширения генетических ресурсов устойчивости WBD. Действительно, высокая устойчивость к WBD была выявлена ​​в других группах зародышевой плазмы.Исследование Sereno et al. (2006) идентифицировали устойчивые образцы в зародышевой плазме дикой природы, первоначально собранные в различных речных бассейнах бразильской Амазонки [28]. Эти устойчивые образцы — CAB0208 и CAB0214 — представляют собой многообещающие родительские линии для использования в программах селекции. Еще одним выдающимся источником устойчивости к WBD является сорт CCN51, который является продуктом независимой селекционной программы, разработанной в 1960-х годах Хомеро Кастро из Эквадора. Несмотря на низкое органолептическое качество, CCN51 ценится за высокую продуктивность и устойчивость к болезням, что делает его еще одной многообещающей родительской линией для использования в программах селекции какао по всему миру. До сих пор молекулярная основа устойчивости к WBD у всех этих разновидностей остается полностью неизвестной, и классическая взаимосвязь между генами устойчивости растений и генами авирулентности грибов еще предстоит идентифицировать и охарактеризовать.

Узкие места в исследованиях ВБД и захватывающие новые направления

ВБД возникает в результате взаимодействия двух немодельных организмов. Поэтому в этой системе все еще отсутствует ряд методологических инструментов, которые обычно используются для модельных организмов.В частности, рутинное применение методов генетической манипуляции является основным узким местом в исследованиях ВБД. В 2009 г. сообщалось о подавлении генов на основе РНКи для некротрофного мицелия M . perniciosa [29]. Однако стабильного сайленсинга генов на инфекционных стадиях патогена добиться не удалось. Совсем недавно Barau et al. переделана М . perniciosa протопластов с кассетой, содержащей ген устойчивости к гигромицину и помеченную зеленым флуоресцентным белком версию гена ATG8 [23]. Даже в этом случае генетические манипуляции не являются стандартной практикой в ​​ M . perniciosa , и ряд основных методов еще предстоит разработать и проверить. В частности, никогда не сообщалось о ген-специфическом мутагенезе, что ограничивает изучение функции генов у этого патогена. Разработка инструмента редактирования CRISPR / Cas9 открывает новые перспективы и является очень многообещающим подходом для эффективного генетического манипулирования M . perniciosa .

Протоколы трансформации уже разработаны для соматических зародышей какао [30].Тем не менее, как многолетнее растение, какао-дерево имеет достаточно длительный жизненный цикл (3-4 года от семени до семени), что существенно затрудняет использование классических генетических подходов при изучении этого растения. В этом контексте заражение томатов изолятами, принадлежащими к S-биотипу M . perniciosa представляет собой более удобную и многообещающую модельную систему для WBD [31,32]. В связи с этим первостепенное значение имеет понимание того, как развивается болезнь у помидоров и какао.Сравнительная геномика и транскриптомика M . perniciosa изолятов, принадлежащих к разным биотипам, предлагает захватывающее направление для расширения наших знаний о механизмах, участвующих в адаптации хозяина у этого патогена.

Наконец, результаты исследовательской программы ВБД могут в конечном итоге превратиться в стратегии более эффективного контроля над болезнью. Несколько стратегий были разработаны и протестированы с ограниченным успехом за последние годы. В настоящее время есть два многообещающих подхода: (1) использование биофунгицидов на основе микопаразита Trichoderma stromaticum , который может противодействовать M . perniciosa [33], и (2) использование лекарств для одновременного блокирования основной и альтернативной дыхательных цепей патогена, что показало высокую эффективность в исследованиях in vitro [16]. Эти стратегии должны быть тщательно оценены в полевых условиях, и, наряду с дисциплинированным управлением ферм, они могут составить важные подходы к борьбе с ВБД в ближайшем будущем. Более того, характеристика генов устойчивости (например, нуклеотид-связывающих лейцин-богатых повторов [NLR]) у устойчивых сортов какао (или даже у родственных ему видов диких растений) может с помощью биотехнологии предоставить дополнительные эффективные способы борьбы с WBD в долгосрочной перспективе. срок.С появлением технологии CRISPR / Cas9 создание устойчивых к болезням растений какао, безусловно, является очень многообещающей и устойчивой стратегией контроля WBD. Однако успех этой стратегии по-прежнему зависит от регулирования этой новой технологии и одобрения общественности.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Алекса Шултинка за критическое прочтение рукописи и Диану Карнейро за подготовку иллюстраций на рис. 1.

Список литературы

1. 1.Райс Р.А., Гринберг Р. (2000) Выращивание какао и сохранение биологического разнообразия. AMBIO: журнал окружающей человека среды 29: 167–173.
2. 2. Перейра Дж. Л., де Алмейда LCC, Сантос С. М. (1996) «Ведьмовая болезнь какао в Баии: попытки искоренения и сдерживания». Защита урожая 15: 743–752.
3. 3. Эванс Х.С. (1980) Плеоморфизм Crinipellis perniciosa , возбудитель болезни какао «ведьмин метла». Труды Британского микологического общества 74: 515–523.
4. 4. Calle H, Cook A, Fernando S (1982) Гистология ведьм-метлы, вызванной в какао Crinipellis perniciosa . Фитопатология 72: 1479–1481.
5. 5. Aime MC, Phillips-Mora W (2005) Возбудители ведьминской метлы и морозной гнили стручков какао (шоколад, Theobroma cacao ) образуют новую линию Marasmiaceae. Mycologia 97: 1012–1022. pmid: 16596953
6. 6. Kerekes J, Desjardin D (2009) Монография родов Crinipellis и Moniliophthora из Юго-Восточной Азии, включая молекулярную филогению региона nrITS.Разнообразие грибов 37: 101
7. 7. Bastos CN, Evans HC (1985) Новый патотип Crinipellis perniciosa (болезнь ведьм метлы) на пасленовых хозяевах. Патология растений 34: 306–312.
8. 8. Griffith GW, Hedger JN (1994) Пространственное распределение мицелия лианового (L-) биотипа агарика Crinipellis perniciosa (Stahel) Singer в тропическом лесу. Новый фитолог 127: 243–259.
9. 9. Хеджер Дж. Н., Пикеринг В., Арагунди Дж. (1987) Изменчивость популяций какао «ведьмин метла» ( Crinipellis perniciosa ).Труды Британского микологического общества 88: 533–546.
10. 10. Griffith GW, Hedger JN (1994) Биология разведения биотипов возбудителя какао «ведьмин метла», Crinipellis perniciosa . Наследственность 72: 278–289.
11. 11. Griffith GW, Hedger JN (1994) Двойная культура Crinipellis perniciosa и каллуса картофеля. Европейский журнал патологии растений 100: 371–379.
12. 12. Frias G, Purdy L, Schmidt R (1991) Биология заражения Crinipellis perniciosa на вегетативных приливах какао.Болезни растений 75: 552–556.
13. 13. Mondego JM, Carazzolle MF, Costa GG, Formighieri EF, Parizzi LP и др. (2008) Обзор генома Moniliophthora perniciosa дает новое понимание болезни какао «ведьмин метла». BMC Genomics 9: 548. pmid: 109
14. 14. de O Barsottini MR, de Oliveira JF, Adamoski D, Teixeira PJ, do Prado PF и др. (2013) Функциональная диверсификация цератоплатанинов в Moniliophthora perniciosa , как видно по дифференциальной экспрессии и специализации функции белков.Mol Plant Microbe Interact 26: 1281–1293. pmid: 239
15. 15. Тейшейра П.Дж., Томазелла Д.П., Видал Р.О., до Прадо П.Ф., Рейс О. и др. (2012) Грибковый патоген Moniliophthora perniciosa имеет гены, подобные растительному PR-1, которые высоко экспрессируются при его взаимодействии с какао. PLoS One 7: e45929. pmid: 23029323
16. 16. Thomazella DP, Teixeira PJ, Oliveira HC, Saviani EE, Rincones J, et al. (2012) Гемибиотрофный какао-патоген Moniliophthora perniciosa зависит от митохондриальной альтернативной оксидазы для биотрофного развития. Новый Фитол. 194: 1025–1034. pmid: 22443281
17. 17. de Oliveira BV, Teixeira GS, Reis O, Barau JG, Teixeira PJ, et al. (2012) Потенциальная роль внеклеточной метанолоксидазы, секретируемой Moniliophthora perniciosa , при болезни ведьм в какао. Fungal Genet Biol 49: 922–932. pmid: 23022488
18. 18. Гарсия О, Маседо Дж. А., Тибурчио Р., Сапароли Дж., Ринконес Дж. И др. (2007) Характеристика некроза и этилен-индуцирующих белков (NEP) у базидиомицета Moniliophthora perniciosa , возбудителя ведьмовой метлы Theobroma cacao .Mycol Res 111: 443–455. pmid: 17512713
19. 19. Argout X, Salse J, Aury JM, Guiltinan MJ, Droc G и др. (2011) Геном Theobroma cacao . Нат Генет 43: 101–108. pmid: 21186351
20. 20. Motamayor JC, Mockaitis K, Schmutz J, Haiminen N, Livingstone D 3rd, et al. (2013) Последовательность генома наиболее широко культивируемого типа какао и ее использование для идентификации генов-кандидатов, регулирующих цвет стручков. Геном Биол 14: r53. pmid: 23731509
21. 21.Скарпари Л.М., Мейнхардт Л.В., Мацзафера П., Помелла А.В., Скьявинато М.А. и др. (2005) Биохимические изменения во время развития ведьмовой метлы: наиболее серьезное заболевание какао в Бразилии, вызываемое Crinipellis perniciosa . J Exp Bot 56: 865–877. pmid: 15642708
22. 22. de Oliveira Ceita G, Macêdo JNA, Santos TB, Alemanno L, da Silva Gesteira A, et al. (2007) Участие в деградации оксалата кальция во время запрограммированной гибели клеток в тканях Theobroma cacao , вызванных гемибиотрофным грибом Moniliophthora perniciosa .Растениеводство 173: 106–117.
23. 23. Барау Дж., Грандис А., Карвалью В.М., Тейшейра Г.С., Запароли Г.Х. и др. (2015) Апопластные и внутриклеточные сахара растений регулируют переходные процессы в развитии какао-болезни ведьм. J Exp Bot 66: 1325–1337. pmid: 25540440
24. 24. Запароли Дж., Барсоттини М.Р., де Оливейра Дж. Ф., Диззи Ф. , Тейшейра П. Дж. И др. (2011) Кристаллическая структура индуцирующего некроз и этилен белка 2, являющегося возбудителем болезни какао «ведьмин метла», выявляет ключевые элементы его активности.Биохимия 50: 9901–9910. pmid: 21999603
25. 25. Tiburcio RA, Costa GG, Carazzolle MF, Mondego JM, Schuster SC и др. (2010) Гены, полученные путем горизонтального переноса, потенциально участвуют в эволюции фитопатогенности у Moniliophthora perniciosa и Moniliophthora roreri , двух основных патогенов какао. J Mol Evol 70: 85–97. pmid: 20033398
26. 26. Teixeira PJ, Thomazella DP, Reis O, do Prado PF, do Rio MC и др.(2014) Профилирование транскриптов с высоким разрешением атипичного биотрофного взаимодействия между Theobroma cacao и грибковым патогеном Moniliophthora perniciosa . Растительная клетка 26: 4245–4269. pmid: 25371547
27. 27. Kilaru A, Bailey Ba, Hasenstein KH (2007) Moniliophthora perniciosa производит гормоны и изменяет эндогенный ауксин и салициловую кислоту в инфицированных листьях какао. Письма FEMS по микробиологии 274: 238–244. pmid: 17610511
28. 28.Sereno ML, Albuquerque PS, Vencovsky R, Figueira A (2006) Генетическое разнообразие и естественная популяционная структура какао ( Theobroma cacao L.) из бразильской Амазонки, оцененная с помощью микросателлитных маркеров. Сохранение генетики 7: 13–24.
29. 29. Карибе душ Сантуш А.С., Сена Дж. А., Сантос С. К., Диас К. В., Пировани С. П. и др. (2009) dsRNA-индуцированное молчание гена у Moniliophthora perniciosa , возбудителя болезни какао «ведьмин метла». Fungal Genet Biol 46: 825–836.pmid: 19602443
30. 30. Максимова С., Миллер С., Антунес де Майоло Г., Пишак С., Янг А. и др. (2003) Стабильная трансформация Theobroma cacao L. и влияние областей прикрепления матрикса на экспрессию GFP. Rep клетки растений 21: 872–883. pmid: 12789505
31. 31. Марелли Дж.П., Максимова С.Н., Грамачо К.П., Кан С., Гильтинан М.Дж. (2009) Биология инфекции Moniliophthora perniciosa на Theobroma cacao и альтернативных хозяевах пасленовых растений. Биология тропических растений 2: 149–160.
32. 32. Deganello J, Leal GA, Rossi ML, Peres LEP, Figueira A (2014) Взаимодействие биотипов Moniliophthora perniciosa с томатом Micro-Tom: модельная система для исследования болезни ведьм метлы Theobroma cacao . Патология растений 63: 1251–1263.
33. 33. Сэмюэлс Г.Дж., Пардо-Шультейс Р., Хеббар К.П., Ламсден Р.Д., Бастос С.Н. и др. (2000) Trichoderma stromaticum sp. nov., паразит возбудителя какао-ведьм.Микологические исследования 104: 760–764.
34. 34. Matheny PB, Curtis JM, Hofstetter V, Aime MC, Moncalvo J-M и др. (2006) Основные клады Agaricales: мультилокусный филогенетический обзор. Mycologia 98: 982–995. pmid: 17486974

Влияние шоколада на работу кишечника.

Многие люди ошибочно полагают, что любой вид шоколада полезен для здоровья. Шоколад действительно полезен, если есть его в необработанном виде.Сырое какао — очень здоровая пища с высоким содержанием флавоноидов.

Но если вы покупаете типичную плитку шоколада из продуктового магазина, скорее всего, она полна сахара, искусственных ароматизаторов и нездоровых жиров. На мой взгляд, этот вид шоколада на самом деле не является шоколадом. И вы не должны есть это.

В разных тропических регионах продаются восхитительные высококачественные шоколадные изделия. Но это не то, что можно купить в магазине на углу.

Промышленный шоколад может вызывать у некоторых людей сильные запоры.В частности, у женщин шоколад может вызвать проблемы с желчным пузырем и печенью.

Статьи по теме:

Я видел, как многие люди пристрастились к шоколаду и ели от двух до трех конфет в день. Если вы регулярно едите шоколад и у вас запор, вполне может быть ссылка. Несколько лет назад был проведен опрос, в ходе которого люди должны были определить, какие продукты они считают наиболее вызывающими запор. На первое место вышел шоколад.

Теперь, если у вас хорошо функционирующий кишечник, пара квадратиков 70% какао-шоколада в день не проблема.Только убедитесь, что можете остановиться на

один или два квадрата. Для многих шоколад похож на вино, трудно остановиться на одном.

Даже если вы едите только высококачественный шоколад, вам не сойдет с рук каждый день съедать плитку большого размера. Съесть столько шоколада — вредно, и, поскольку он является пищей, вызывающей запор, вы можете пожалеть об этом.

Если вы большой поклонник шоколада, подумайте о том, чтобы добавить в свой рацион пищеварительные ферменты. Ферменты помогут более эффективно расщеплять жир в шоколаде.Однако, если у вас запор, я бы не пошел по этому пути. Я бы полностью отказался от шоколада.

Источники:

Шоу Гэри Нулла

В 1852 году Рочестерская женская ассоциация по борьбе с рабством пригласила аболициониста, активиста и государственного деятеля Фредерика Дугласа выступить на праздновании Дня независимости четвертого июля в Рочестере, штат Нью-Йорк.

Он отказался.

Но вместо этого он согласился выступить 5 июля.

Перед аудиторией, состоящей из вашингтонских политиков, белых аболиционистов и президента Милларда Филлмора, Дуглас представил то, что до сих пор является одним из величайших примеров того, как говорить правду властям. Безапелляционная критика Дугласа лицемерия Америки по-прежнему актуальна по сей день. Хотя речь преподается в классах истории по всей стране, большинство учебников истории и средств массовой информации опубликовали только сокращенную версию речи.

Полный адрес Дугласа, который длился более часа, представляет собой урок истории, политический трактат и диссертацию по религии. Поскольку он заслуживает того, чтобы его прочитали целиком, мы решили поделиться исходной речью в ее несокращенной форме.

Господин Президент, Друзья и Сограждане:

Тот, кто мог обращаться к этой аудитории без дрожи, имеет более сильные нервы, чем у меня.Я не помню, чтобы когда-либо выступал в качестве оратора перед каким-либо собранием с большей сдержанностью или с большим недоверием к своим способностям, чем сегодня. Меня охватило чувство, совершенно неблагоприятное для использования моих ограниченных речевых способностей. Передо мной стоит задача, которая требует тщательного предварительного обдумывания и изучения для правильного выполнения. Я знаю, что подобные извинения обычно считаются пустыми и бессмысленными. Я надеюсь, однако, что мой не будет считаться таковым. Если бы я выглядел непринужденно, моя внешность сильно исказила бы меня.Тот небольшой опыт, который я приобрел в выступлениях на публичных собраниях в сельских школах, в данном случае мне ни к чему.

В бумагах и плакатах написано, что я должен выступить с речью 4 июля. Это определенно звучит масштабно и необычно, поскольку это правда, что я часто имел честь выступать в этом прекрасном Зале и обращаться ко многим, кто сейчас почтил меня своим присутствием. Но ни их знакомые лица, ни идеальный образ Коринфского зала, кажется, не избавляют меня от смущения.

Дело в том, дамы и господа, что расстояние между этой платформой и плантацией рабов, с которой я сбежал, велико — и трудности, которые нужно преодолеть, чтобы добраться от последнего к первому, отнюдь не незначительны. То, что я сегодня здесь, для меня вызывает не только благодарность, но и удивление. Поэтому вы не удивитесь тому, что я скажу. Я не демонстрирую ни тщательной подготовки, ни украшаю свою речь каким-либо высокопарным излишеством.Обладая небольшим опытом и меньшим обучением, я мог поспешно и несовершенно собирать свои мысли вместе; и, полагаясь на ваше терпение и великодушие, я продолжу изложить их вам.

В рамках этого празднования 4 июля. Это день рождения вашей национальной независимости и вашей политической свободы. Это для вас то, чем была Пасха для освобожденного народа Божьего. Он возвращает ваш разум к тому дню и к действию вашего великого избавления; и знамениям и чудесам, связанным с этим деянием и тем днем.Этот праздник также знаменует начало еще одного года в вашей национальной жизни; и напоминает вам, что Республике Америка сейчас 76 лет. Я рад, сограждане, что ваш народ такой молодой. Семьдесят шесть лет — хоть и хорошая старость для человека, но всего лишь частичка в жизни нации. Три десятка лет и десять — отведенное время для отдельных мужчин; но народы исчисляют свои годы тысячами. В соответствии с этим фактом, вы даже сейчас только начинаете свою национальную карьеру, еще пребывая в периоде детства.Повторяю, я рад, что это так. В этой мысли есть надежда, и надежда очень нужна под темными облаками, которые опускаются над горизонтом. Глаз реформатора встречает гневные вспышки, предвещающие бедственные времена; но его сердце может забиться легче при мысли, что Америка молода и что она все еще находится на впечатляющей стадии своего существования. Разве он не может надеяться, что высокие уроки мудрости, справедливости и истины еще укажут направление ее судьбе? Будь нация старше, сердце патриота могло бы быть печальнее, а лоб реформатора тяжелее.Его будущее может быть окутано мраком, и надежда его пророков погаснет в печали. Утешает мысль о том, что Америка молода. Великие ручьи нелегко свернуть с каналов, которые с течением веков изнашиваются глубоко. Иногда они могут подниматься в тихом и величественном величии и затапливать землю, освежая и удобряя землю своими таинственными свойствами. Они также могут восстать в гневе и ярости и унести на своих гневных волнах накопленное за годы тяжелого труда и лишений богатство.Однако они постепенно возвращаются к тому же старому каналу и текут так же безмятежно, как всегда. Но хотя реку нельзя повернуть в сторону, она может высохнуть и не оставить после себя ничего, кроме увядшей ветви и неприглядной скалы, чтобы завывать на пронизывающем бездну ветру, печальная история ушедшей славы. Как с реками, так и с народами.

Сограждане, я не берусь подробно останавливаться на объединениях, которые группируются в этот день. Простая история заключается в том, что 76 лет назад жители этой страны были британскими подданными.Стиль и титул вашего «суверенного народа» (которым вы славитесь сейчас) еще не зародились. Вы были под британской короной. Ваши отцы считали английское правительство своим правительством; и Англия как отечество. Вы знаете, что это домашнее правительство, хотя и находилось на значительном расстоянии от вашего дома, при осуществлении своих родительских прерогатив наложило на своих колониальных детей такие ограничения, бремя и ограничения, которые, по его зрелому суждению, сочло разумным и правильным. и собственно.

Но, ваши отцы, которые не приняли модную идею сегодняшнего дня о непогрешимости правительства и абсолютном характере его действий, предположительно отличались от местного правительства в отношении мудрости и справедливости некоторых из них. эти бремя и ограничения.В своем возбуждении они зашли так далеко, что объявили правительственные меры несправедливыми, неразумными, репрессивными и вообще такими, которым не следует спокойно подчиняться. Вряд ли мне, сограждане, нужно говорить, что мое мнение об этих мерах полностью совпадает с мнением ваших отцов. Такое заявление о согласии с моей стороны никому ничего не стоит. Конечно, это ничего не доказало бы, какую роль я мог бы принять, если бы я жил во время великой борьбы 1776 года. Сказать сейчас, что Америка была права, а Англия ошибалась, чрезвычайно легко.Это может сказать каждый; подлый подлец, не меньше, чем благородный храбрец, может легкомысленно отрицать тиранию Англии по отношению к американским колониям. Это модно; но было время, когда высказывания против Англии и в пользу колоний испытывали души людей. Те, кто поступал так, в свое время считались преступниками, агитаторами и мятежниками, опасными людьми. Стать на сторону правильного, против зла, со слабым против сильного и с угнетенным против угнетателя! в этом и заключается заслуга, которая из всех остальных кажется немодной в наши дни.Дело свободы может быть поражено людьми, которые хвалят дела ваших отцов. Но, продолжаем.

Чувствуя, что домашнее правительство жестоко и несправедливо с ними обращается, ваши отцы, как люди честные и люди духа, искренне искали возмещения. Они подали прошения и протестовали; они сделали это чинно, уважительно и лояльно. Их поведение было совершенно безупречным. Однако это не отвечало цели. Они видели, как к ним относятся с суверенным безразличием, холодностью и презрением.И все же они продолжали настойчиво. Они были не из тех, кто оглядывался назад.

По мере того, как якорь крепче держится, когда корабль бросает шторм, так и дело ваших отцов становилось сильнее, поскольку оно выдерживало леденящие кровь взрывы королевского недовольства. Величайшие и лучшие британские государственные деятели признали его справедливость, и величайшее красноречие британского сената поддержало его. Но с той слепотой, которая кажется неизменной характеристикой тиранов, поскольку фараон и его войска были утоплены в Красном море, британское правительство настаивало на обжалованиях.

Мы полагаем, что безумие этого курса признает теперь даже Англия; но мы опасаемся, что урок полностью упущен для нашего нынешнего правителя.

Угнетение сводит с ума мудрого. Ваши отцы были мудрыми людьми, и, если они не сходили с ума, они становились беспокойными при таком обращении. Они чувствовали себя жертвами тяжких обид, совершенно неизлечимых в их колониальной способности. У храбрых всегда есть средство от угнетения.Именно здесь родилась идея полного отделения колоний от короны! Это была потрясающая идея, гораздо более поразительная, чем мы, на таком расстоянии времени, думаем о ней. Робкие и расчетливые (как уже говорилось) того дня, конечно, были шокированы и встревожены им.

Такие люди жили тогда, жили раньше и, вероятно, когда-нибудь будут иметь место на этой планете; и их курс относительно любого великого изменения (независимо от того, насколько велико благо, которое должно быть достигнуто, или неправильное, которое должно быть исправлено с его помощью), может быть вычислено с такой точностью, с какой может быть курс звезд.Они ненавидят все изменения, но серебро, золото и медь меняются! Они всегда решительно поддерживают такого рода изменения.

Эти люди назывались тори во времена ваших отцов; и это название, вероятно, выражало ту же идею, что подразумевается под более современным, хотя и несколько менее благозвучным термином, который мы часто находим в наших газетах, применительно к некоторым из наших старых политиков.

Их оппозиция тогдашней опасной мысли была серьезной и мощной; но, несмотря на весь их террор и устрашающие выступления против него, тревожная и революционная идея продвигалась вперед, а вместе с ней и страна.

2 июля 1776 года старый Континентальный Конгресс, к ужасу любителей легкости и почитателей собственности, облек эту ужасную идею со всей властью национального одобрения. Они сделали это в форме резолюции; и поскольку мы редко приходим к решению, составленным в наши дни, прозрачность которого вообще равна этой, это может освежить ваши умы и помочь моей истории, если я ее прочту. «Решено, что эти объединенные колонии по праву должны быть свободными и независимыми государствами; что они освобождены от всякой лояльности британской короне; и что всякая политическая связь между ними и государством Великобритании прервана и должна быть прекращена.”

Граждане, ваши отцы выполнили это решение. Им это удалось; и сегодня вы пожинаете плоды их успеха. Полученная свобода принадлежит вам; и вы, следовательно, можете достойно отметить эту годовщину. 4 июля — это первый великий факт в истории вашей страны, самый важный момент в цепи вашей еще неразвитой судьбы.

Гордость и патриотизм, а не меньшая благодарность, побуждают вас праздновать и хранить их в вечной памяти.Я сказал, что Декларация независимости является замком на цепи судьбы вашей нации; так, действительно, я считаю это. Принципы, содержащиеся в этом документе, являются принципами экономии. Придерживайтесь этих принципов, будьте верны им во всех случаях, везде, против всех врагов и любой ценой.

С круглой вершины вашего государственного корабля видны темные грозные тучи. Тяжелые валы, словно горы вдали, открывают с подветренной стороны огромные формы кремнистых скал! Этот болт вытащен, эта цепь порвана, и все потеряно.Цепляйтесь за этот день — цепляйтесь за него и за его принципы с хваткой брошенного штормом моряка за рангоут в полночь.

Становление нации при любых обстоятельствах — событие интересное. Но, помимо общих соображений, были особые обстоятельства, делавшие появление этой республики событием особой привлекательности.

Вся сцена, когда я оглядываюсь назад, была простой, величавой и возвышенной.

Население страны в то время составляло ничтожные три миллиона человек. Страна была бедна боеприпасами войны. Население было слабым и рассредоточенным, а страна — непокоренной пустыней. Тогда не было средств концерта и сочетания, которые существуют сейчас. Ни пар, ни молния тогда не были сведены к порядку и дисциплине. Путь от Потомака до Делавэра длился много дней. При этих и бесчисленных других недостатках ваши отцы заявили о своей свободе и независимости и победили.

Сограждане, я не испытываю недостатка в уважении к отцам этой республики. Подписавшие Декларацию независимости были храбрыми людьми. Они тоже были великими людьми — достаточно великими, чтобы прославить преклонных лет. Нечасто случается, чтобы нация вырастила за один раз такое количество поистине великих людей. Точка зрения, с которой я вынужден смотреть на них, конечно, не самая благоприятная; и все же я не могу смотреть на их великие дела с меньшим восхищением.Они были государственными деятелями, патриотами и героями, и за то хорошее, что они сделали, и за принципы, за которые они отстаивали, я объединюсь с вами, чтобы почтить их память.

Они любили свою страну больше, чем свои личные интересы; и хотя это не наивысшая форма человеческого совершенства, все согласятся, что это редкая добродетель и что, когда она проявляется, она должна вызывать уважение. Тот, кто разумно отдаст свою жизнь за свою страну, — это человек, которого не в человеческой природе презирать.Ваши отцы поставили на карту свою жизнь, свое состояние и свою священную честь ради дела своей страны. Восхищаясь свободой, они упускали из виду все другие интересы.

Они были мирными людьми; но они предпочли революцию мирному подчинению рабству. Они были тихими людьми; но они не уклонились от агитации против угнетения. Они проявили терпение; но они знали его пределы. Они верили в порядок; но не в порядке тирании.С ними не было «улажено» ничего неправильного. Для них справедливость, свобода и человечность были «окончательными»; не рабство и угнетение. Вы можете беречь память о таких людях. Они были великими в свое время и в свое время. Их солидная мужественность выделяется тем больше, чем мы противопоставляем их этим временам упадка.

Какими осмотрительными, точными и пропорциональными были все их движения! Как непохоже на политиков часа! Их государственная мудрость не ограничивалась преходящим моментом и простиралась по силе в далекое будущее.Они ухватились за вечные принципы и подали славный пример в свою защиту. Отметьте их!

Полностью осознавая трудности, с которыми предстоит столкнуться, твердо веря в правоту своего дела, с честью приглашая на пристальный взгляд мир, благоговейно взывая к небу, чтобы засвидетельствовать свою искренность, твердо осознавая торжественную ответственность, которую они собирались взять на себя, мудро оценивая ужасные шансы против них, ваши отцы, отцы этой республики, очень сознательно, вдохновленные славным патриотизмом и с возвышенной верой в великие принципы справедливости и свободы, заложили глубокий краеугольный камень национальной надстройки, которая выросла и продолжает расти вокруг вас в величии.

У этой фундаментальной работы этот день юбилейный. Нашему взору предстает радостный энтузиазм. Знамена и вымпелы радостно развеваются на ветру. Шум бизнеса тоже приглушен. Похоже, что даже Маммон в этот день ушел из рук.